文档介绍：陵川雪松病害病原培养实验报告雪松为松科常绿乔木, 是世界三大著名观赏树种之一。由于雪松适应性强,病虫害少,树形优美,常作为城市庭园和道路绿化树种。雪松很少发生病害, 目前国内报道有以下几种:(1) 假蜜环菌引起的根朽病。(2) 异担孔菌引起的针叶树根白腐病。(3) 蛛形葡萄孢菌引起的雪松枯梢病。(4) 松球壳孢菌引起的雪松梢枝病。(5) 聚生小穴壳菌引起的雪松溃疡病( 6 )樟疫霉菌、掘氏疫霉菌和寄生疫霉菌引起的雪松疫病, 主要症状为根腐、溃疡、猝倒和立枯, 造成植株直立枯死。(7 )葡萄孢菌引起的雪松灰霉病,造成嫩梢发生溃疡、枯梢及小枝枝枯。(摘自雪松针叶枯斑病病原鉴定及其生物学特性研究) 。以上病害除蛛形葡萄孢菌和松球壳孢菌引起雪松枝梢枯死外, 其他 5 种病害分别危害根茎和干部皮层。引起雪松针叶病害的报道较少, 有过报道的有雪松落叶病和雪松赤枯病。雪松落叶病( 松针枯病) 是下部的针叶先出现症状, 逐渐向上蔓延,严重时全株干枯死亡,受害的针叶从尖端开始一段一段的发黄; 以后逐渐变深褐色。雪松赤枯病症状为松针受害后先出现黄色段斑, 渐变褐, 最后呈灰白色或暗灰色, 稍凹陷的病斑。病斑与健康组织交界处常有 1 暗红色的环圈, 病部散生黑色小点, 即病菌的分生孢子盘, 以叶尖枯死为主。我们将发病叶片采集回来发现, 病叶表面散生有黑色小点, 叶尖变白枯死, 病斑与健康组织交界处有暗红色的环圈, 我们初步鉴定为图 1. 病叶黑点症图 2. 叶尖发白症状图 3. 病叶接种 7 天后的菌落形态。 A、B 为不同视野 AB 此病为雪松赤枯病。为了更进一步的证明此病的病原, 来更有力的鉴定此病害,我们对此做了病原培养实验。一、病原菌的分离纯化 1. 组织培养: 取新鲜雪松病叶用无菌水清洗晾干后,剪取病健交界处组织, 大小约 3mm 左右, 在超净工作台内,用 75% 的酒精消毒 1min , 用无菌水冲洗 3次, 用灭菌的滤纸吸干水分, 接种到 PDA 培养基上,在每皿中央放置 4~5 块,置于 25℃恒温培养箱中培养。培养 7 天后可以看到菌落中心发黑, 边缘发白, 可以初步判断为此病有真菌侵染。图 4. 光学显微镜下的病原菌分生孢子。 A、B 为不同视角 A B 2 、病原镜检将培养 7 天后的菌落,用已用酒精灯灭菌的挑针挑取一小块黑白交界处的菌块, 放置于用 75% 的酒精消毒的载玻片上, 在光学显微镜下进行镜检。( 除了菌落, 所有的器具均在超净台紫外灭菌 15 分钟以上,整个操作在超净台完成) 从图中可以看到雪松病叶中有真菌侵染,此病原分生孢子为链格孢属, 和去年引起水杉赤枯病的病原一样。为了证明此病就是这种病原侵染所致,我们必须再做病原菌的纯化和健康雪松叶子接种实验。 3 、病原菌的分离纯化(1 )分离纯化将培养 7 天后形成的菌落,用挑针挑取菌落边缘的新鲜菌丝,转到新新鲜的 PDA 培养基上进行纯化培养。(2) 单孢分离: 将已纯化培养 7 天后的菌落, 待产孢后向平板中加入灭菌水轻微图 5.