文档介绍：实验:细胞培养1•实验FI的初步常握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程,为生物工程在医学上的应用打下基础。实验原理从生物体屮取出某种组织或细胞,模拟体内生理条件,在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代,这一过程称为细胞培养。细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞,并在有控制的环境条件下进行实验,避免了体内实验吋的许多复杂因索,还可以与体内实验互为补充,可同吋提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象,耗费少,比较经济,因此成为生物学研究的重要手段。近年来,在体细胞遗传、分化、胚胎发生、肿瘤发生、免疫学、细胞工程、放射生物学以及老年学等一系列的研究领域屮得到广泛的应用,并取得了丰硕的成果。细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养;半原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养,即将培养的细胞分散后,从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器屮扩大培养,为传代培养,传代培养的累积次数就是细胞的代数。细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、pH值、无机盐影响,消毒、配液等均有严格的规范和要求,特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。实验用nn1材料和标本乳兔、HeLa细胞(人宫颈癌细胞)、平皿、培养瓶、吸管、离心管(灭菌后备用)、酒精灯、烧杯、超净工作台、二氧化碳培养箱、倒置显微镜。%小牛血清的MEM培养液、,%胰蛋白酶一0・02%EDTA混合消化液、75%乙醇。(Cellculture)是模拟机体内生理条件,将细胞从机体屮取出,在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代,进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。近年来,广泛地应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域,发展成一种重要生物技术,并取得显著成就。由体内直接取出组织或细胞进行培养叫原代培养。原代培养细胞离体时间短,性状与体内相似,适用于研究。一般说来,幼稚状态的组织和细胞,如:动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养。。然后,把整个动物浸入盛有75%乙醇的烧杯屮数秒钟消毒,取出后放在大平皿屮携入超净台。用消过毒的剪刀剪开用碘洒和乙醇再次消毒后的皮肤,剖腹取出肝脏或肾脏。置于无菌平皿屮。.切割用灭菌的PBS液将取出的脏器清洗三次,然后用眼科手术剪刀仔细将组织反复剪碎,直到成山品左右的小块,再用PBS清洗,洗到组织块发白为止。移入无菌离心管屮,静置数分钟,使组织块自然沉淀到管底,弃去上清。.消化、%%EDTA混合消化液lml,加入离心管中,与组织块混匀后,加丄管口塞子,37°C水浴屮消化8〜10分钟,每隔几分钟摇动一下试管,使组织与消化液充分接触,静止,吸去上清,向离心管屮加入5〜10ml含5%小牛血清的MEM培养基,用吸管吹打混匀,移入二个培养瓶屮,置于二氧化碳培养箱小培养。,并开始生长,如接种的细胞密度适宜,5天到一周即可形成单层。