文档介绍：微生物实验室里常用的灭菌方法汇总!
微生物学实验室常用的器材一般包括玻璃器材、金 属器械、橡胶制品及塑料制品等，每类器材的处理 及消毒措施都有不同。严格的消毒灭菌工作极为重 要，直接影响着整个实验能否顺利进行。
一、消毒灭菌方法
目前气、工作面、操作者皮 肤、某些实验器皿等。常用的化学消毒剂包括甲醛、高镒酸钾、70%~ 75%
乙醇、过氧乙酸、来苏尔水、%新洁尔灭、环氧乙烷、碘伏或碘酊 等。其中利用70%〜75%乙醇、%〜%氯化汞、10%次氯酸钠、饱和 漂白粉等进行实验材料的灭菌；利用甲醛加高镒酸钾［(2mL甲醛+lg高镒 酸钾）/m3］或乙二醇（6mL/m3）等加热熏蒸法进行无菌室和培养室的消毒。 在使用时应注意安全，特别是用在皮肤或实验材料上的消毒剂，须选用合 适的药剂种类、浓度和处理时间，才能达到安全和灭菌的目的。
抗生素抑菌法
主要用于培养基，是培养过程中预防微生物污染的重要手段以及作为微生 物污染不严重时的“急救，，措施。常用的抗生素有青霉素、链霉素和新霉素 等。
二、不同种类物品及培养物的消毒灭菌方法
无菌操作室灭菌
由于无菌操作室的污染来源主要是空气中的细菌和真菌抱子，因此长期停 用后的无菌操作室应进行熏蒸灭菌，熏蒸是用高镐酸钾+甲醛［（2mL甲醛 + lg高镐酸钾）/m3］进行无菌室的灭菌。经常使用的无菌操作室，在每次使 用前都应进行地面卫生清洁，并用紫外线灯照射30min,进行空气灭菌。 对超净工作台，每次操作前用紫外灯照射30min,然后用70%〜75%酒精 擦拭。
培养液灭菌
培养液在制备过程中带有各种杂菌，分装后应立即灭菌，至少也应在4小 时内完成灭菌工序。目前常用过滤除菌法除去培养物操作液和培养液中的 细菌。或对培养液中耐热组分先进行高压蒸汽灭菌，然后在无菌室加入经 过过滤除菌的不耐热溶液，混匀后分装备用。
使用高压蒸汽灭菌器灭菌时，将分装好的培养液放入底部有一定量（淹没加 热管）凉水的高压蒸汽灭菌器内，- MPa时排净灭菌器内 冷空气，以便使蒸汽能到达各个消毒部位，保证消毒灭菌彻底。然后继续 加压加热，~°C,保持15~20min即 可。由于消毒灭菌效果取决于温度而不是压力，所以在一定压力下保持较 长的消毒灭菌时间是必须的。
在121°C的蒸汽温度下可以很快杀死各种细菌及高度耐热的芽泡杆菌，因 此许多培养液的消毒灭菌压力、温度一般保持在0,10~> 12rC„ 消毒灭菌时间与需要消毒灭菌的培养液量密切相关（表1）,时间不足达不 到灭菌效果，时间过长培养液内的一些化学物质遭到破坏，影响培养液成 分。消毒灭菌结束后，关闭热源，只有当灭菌器内压力降为零时才能打开 放气阀，排除剩余蒸汽，取出培养液。不可在压力较高时打开放气阀，引 起减压沸腾，使容器中液体溢出。培养液组成中如含有遇热易分解的物 质，则需用过滤方法消毒灭菌。首先对培养液中耐热组分进行高压蒸汽灭 菌后放置在无菌场所，固体培养液在40°C左右琼脂即将凝结前，加入经过 过滤除菌的不耐热溶液，混匀后冷却备用。
表1培养基高压蒸汽灭菌所必需的最少时间
玻璃器皿、塑料器皿和器械灭菌
玻璃器皿可进行干热灭菌或高压蒸汽灭菌，但在蒸汽灭菌后最好及时烘干