文档介绍：实验二一巨噬细胞吞噬功能实验【原理】巨噬细胞是单核吞噬细胞系统的主要细胞, 局域活跃的吞噬功能。吞噬细胞受抗原刺激后活化,可使吞噬功能明显增强。在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后,再给小鼠腹腔注射鸡血红细胞, 30min 后处死小鼠, 取出腹腔液, 以冷亚甲蓝染色, 显微镜下计数吞噬红细胞的百分数, 及观察吞噬细胞内鸡红细胞的数目,以判断吞噬细胞的杀伤能力,由此间接地测定机体的非特异性免疫水平。【方法】体内法: (1) 实验前 3 小时,小鼠腹腔注射 6% 无菌淀粉液 1ml ,诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。(2) 实验时, 每只小鼠注射鸡红细胞 1ml , 轻柔腹部, 使其在腹腔中分布均匀, 利于吞噬。(3) 30min 后,将小鼠拉颈处死,固定,打开腹腔暴露肠管,用载玻片轻擦腹腔,使腹腔液均匀涂于载玻片过,再滴一滴 % 冷亚甲蓝溶液,盖上盖玻片。(4) 高倍镜下进行观察,计数。【结果】【分析】在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后, 再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液, 可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象,并且可看到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。二沉淀反应双向琼脂扩散实验【原理】将可溶性抗原与相应抗体分别加入琼脂板上的孔内, 二者均可发生扩散, 并且随扩散距离的增大浓度降低,在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。本实验是定性实验,常用于分析抗原抗体的纯度关系以及相互关系。【方法】(1) 制板:将熔化的 1% 琼脂加在载玻片上约 5ml (2) 打孔:待琼脂凝固后,将载玻片置于打孔样板上,用打孔器打孔(3) 加样:在中央孔内加抗体,上下两孔加抗原 1 ,左右加抗原二,每孔加 10μl (4) 结果观察:将琼脂板置于湿盒, 37℃一天后观察结果。【结果】在中央孔与添加抗原 1 的孔之间出现沉淀线,有抗原抗体反应,为阳性反应,说明抗原 1 与抗体相对应。中央孔与添加抗原 2 的孔之间没有沉淀线, 说明抗原 2 与抗体之间不相对应。【分析】抗体与抗原发生扩散时, 随扩散距离的增大浓度降低, 在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。当有沉淀线出现时,说明有抗原抗体反应。琼脂铺板时要一次铺成,并且铺设均匀。打孔时要注意垂直打孔,注意不要有裂隙产生。