文档介绍：葡萄果醋发酵用醋酸菌的分离与鉴定研究
葡萄果醋发酵用醋酸菌的分离与鉴定研究
[摘要]主要采用土壤以及烂化的葡萄皮作为样品,并进行利用增值培养以及定量、定性等培养手段,同时通过首次鉴定及再次鉴定等,从而筛选出一株具有较高醋酸、产量稳定的醋酸菌。
[关键词]葡萄果醋醋酸菌分离鉴定
1前言
所谓的葡萄果醋,就是利用葡萄酒或者是葡萄进行产生的残渣皮,同时经过采用现代化生物技术进行酿制,进而形成的一种酸味饮料,该饮料含有独特的风味以及丰富的营养。葡萄果醋同时具备水果与食醋的营养保健作用,以及丰富的维生素和有机酸。能够有效调节血脂,抗氧化等功能。
2材料准备
首先准备的材料是醋醅,其属于一种无核紫葡萄。其次是菌种,其选择的是活性干酵母D254。再次是试剂的准备,有酚酞指示剂、酵母膏、葡萄糖、NaOH及无水乙醇等。最后就是培养基的准备,有醋酸菌固定培养基及醋酸菌保藏培养基,其中需要的琼脂、酵母膏、葡萄糖、碳酸钙及无水乙醇,分别是2%、1%、1%、2%、6%vol;%、1%、1%、%,6%vol,两中培养基均需自然pH值。而醋酸菌液体培养基需要1%的葡萄糖及酵母膏,6%vol的无水乙醇,也是自然pH值。
3葡萄果醋发酵用醋酸菌的分离研究

针对醋酸菌的分离研究,首先采用容量为20mL的葡萄醋,该葡萄醋属于自然发酵的,接着放入容量为250ml的三角瓶当中,同时再添加容量为100ml的基础培养基,之后将其处于32℃恒温环境中进行培养,培养时间为两天。通过两天培养之后,进行提取容量为1ml的增殖液,并放入无菌蒸馏水当中,该蒸馏水的容量为9ml,然后进行稀释至三个梯度,分别是10-5、10-6及10-7,在这三个梯度里提取稀释液,每一个梯度均提取
。通过采用平板划线的方法与倾注的方法进行接种,并放置于分离培养基当中,给予每个梯度的平板分别三个,放在32℃的环境中进行培养,培养时间最长不能超过3天,最短不能低于2天,最后认真观察。在平板中的稀释液有着不一致的稀释度,所以在进行挑选单菌落时,必须从该平板中进行挑选,才能挑选出形态相同、长势较好以及菌落完整的单菌落。经过单菌落纯化后的菌株,在斜面保藏培养基进行接种,然后通过在32℃的环境下进行两天培养之后,保藏在4℃的冰箱里。

选取一环活化的菌株,分别在容量为100ml的基础培养基里进行培养,%vol乙醇,并放在32℃恒温环境当中进行静置培养,培养时间为三天。然后通过采用离心机将菌体清除,在一个小烧杯里放入容量为5ml的无菌体培养液,,直到其培养液显示为中性为止。%的FeCl3溶液,滴入的滴数为5滴,观察其变化情况,如果有红褐色的沉淀出现,那么该菌株很大程度上就是醋酸菌。把醋酸菌菌株放在斜面培养基里进行接种,经过在32℃环境中进行培养2天之后,保存于4℃的冰箱中。

选出良好的醋酸菌之后,分别放入醋酸菌液体培养基里进行接种,并在30℃的环境下进行3天的培养,然后进行测定培养后的醋酸菌的产酸量,通过采用碱式滴定的方法进行测定,其公式为V
aOH×60
L,在这个公式当中,aOH表示的是氢氧化钠的浓度,6