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抗原或抗体检测的方法.docx

上传人:shugezhang2 2022/6/5 文件大小:13 KB

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抗原或抗体检测的方法.docx

文档介绍

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抗原或抗体检测的方法
由于各种检测方法中所用的抗原性状不同,出现结果的现象也不同。最广泛应用方法线,本法常用于抗原或抗体的定性或定量检测,或用于两种抗原材料的抗原相关性分析(图20-2)。
图20-2双向免疫扩散试验示意图
5. 对流免疫电泳对流电泳(counterimmunoelectrophoresis)是一敏感快速的检测方法,即在电场作用下的双向免疫扩散。将琼脂板放入电泳槽内,使琼脂板的两孔沿着电场的方向,于负极侧的孔内加入抗原,于正极侧的孔内加入抗体,通电后,抗原带负电荷向正极泳动,抗体分子虽也带负电荷,但因分子量大,向正极的位移小,而受琼脂中电渗作用向负极移动,抗原和抗体能较快地集中在两孔之间的琼脂中形成免疫复合物的沉淀线。只需1小时左右即可观察结果。
免疫电泳免疫电泳(immunoelectrophoresis)的方法分成两个步骤,即先进行电泳,再进行琼脂扩散。先将样品加入琼脂中电泳,将抗原各成分依电泳速度不同而分散开。然后在适当的位置上沿电泳方向挖一直线形槽,于槽内加入含有针对各种抗原混合抗体液,让各抗原成分与相应抗体进行双向免疫扩散,可形成多答卷沉淀线。常用此法进行血清的蛋白种类分析。对于免疫球蛋白缺损或增多的疾病的诊断或鉴别诊断有重要意义(图20-3)。
图20-3免疫电泳法基本步示决图
6. 免疫印迹法免疫印迹法(immunoblotting)又称为Western印迹法,用于AIDS的血清抗体检测。第一步,为电泳分离HIV抗原,在电场中根据分子量大小不同病毒抗原各成分散开。第二步,将电泳分离的蛋白质转移到***纤维膜上(电印迹),然后将印迹有病毒抗原的***纤维膜浸湿于病人血清中。如果病人血清中含有与一种或几种抗原相对应的抗体的话,则在该抗原印迹部位形成免疫复合物沉淀。在洗去未沉淀的抗原和抗体后,在膜上加标记的抗人免疫球蛋白的抗体,此抗体可以和病毒抗原与人抗体形成的免疫复合物发生反应,最后加入显色底物(如果抗人Ig是用酶标记的)或做放射自显影(抗人Ig用1251标记)以显示结果(图20-4)。
图20-4用免疫印迹法检查患者血清中的HIV病毒抗体第一步:经电泳将HIV混合抗合抗原按分子量大小分离;第二步:将已分离的抗原经电印迹转移到***纤维膜上;第三步:将待检病人血清加入覆盖于***纤维膜上;第四步:加入标记的第二抗体使之覆盖膜上;第五步:加入显色底物(或放射自显影)显现第二抗体
(二)凝集反应
细菌、红细胞或表面带有抗原的乳胶颗粒等都是不溶性的颗粒抗原,当与相应抗体结合,抗原与抗体结合形成凝集团块,即称为凝集反应(agglutination)。
1. 直接凝集直接凝集(directagglutination)是将细菌或红细胞与相应抗体结合产生的细菌凝集或红细胞凝集现象。可用于传染病诊断如肥达氏反应(Widalreaction)诊断伤寒病。或利用血细胞凝集现象检查血型。
2. 间接凝集间接凝集(indirectagglutination)是用可溶性抗原包被在乳胶颗粒或红细胞表面,与相应抗体混合出现的凝集现象。如用Y球蛋白包乳胶颗粒检测类风湿关节炎病人血清中的类风湿因子