文档介绍：菌种操作规程
（Master Operation Procedure for ARA Production Strain）
CA/WA001—2004版
1目的
建立菌种操作规程，确保菌种保藏、自然选育、生产供种操作用具保温60分钟。
消毒结束后，取出斜面待温度降至40～50℃时，将大试管或茄子瓶摆成斜面，空白斜面培养1～2天，观察无杂菌生长后，包装好备用，并填写《PDA斜面配制记录》和《培养基接种用具消毒记录》。
母斜面接种及培养
母斜面接种由两人操作，一人为主操作安瓿管，一人为辅操作大试管。首先用消毒好的砂轮在安瓿管上端1/4处划痕，用纱布包住，掰开上端。
，搅拌均匀，～，每支安瓿管接3支大试管。
用无菌铲将种液在斜面上划线，使之均匀分布，然后塞上棉塞，用双层纱布扎口，并将接种铲在肉汤培养基中蘸一下做无菌试验，将肉汤放置37℃培养间培养。
将接种后的母斜面放置培养间，温度28℃，湿度50～70%，培养7～9天，观察生长情况，并填写《母斜面生长记录》和《温度湿度原始记录》。
母斜面生长成熟后，取下，%新洁而灭溶液灭菌后再用牛皮纸扎口后放置冰箱低温保藏备用温度2～8℃，保藏期不超过15天；无菌试验不正常则按废样液处理办法处理并填写《废样液处理记录》。
子斜面接种及培养
子斜面接种由两人操作，一人为主操作，一人为辅操作。首先将子斜面和母斜面的双层纱布解去，将绳子和纱布放在超净台左边待用。主操作将母斜面和子斜面的棉塞逐个打开，并在酒精灯火焰上烧瓶口至无水雾为止。
主操作用无菌铲将母斜面上的孢子和菌丝刮下，接种于子斜面中，利用子斜面的冷凝水，将孢子和菌丝打散，均匀涂布于子斜面表面，然后塞上棉塞，用双层纱布扎口，并将接种铲在肉汤培养基中蘸一下做无菌试验，将肉汤放置36～38℃培养间培养。一支母斜面接种一般接1～2支子斜面。
将接种后的子斜面放置培养间，温度28℃，湿度50～70%，培养7～9天，观察生长情况，并填写《子斜面生长记录》和《温度湿度原始记录》。
子斜面生长成熟后，取下，%新洁而灭溶液灭菌后再用牛皮纸扎口后放置冰箱低温保藏备用，保藏期不超过15天；无菌试验不正常则按废样液处理办法处理并填写《废样液处理记录》。
母瓶菌丝的制备
母瓶培养基配方
成份
葡萄糖
酵母粉
PH
配比
3%
%
～
规格
分析纯
符合酵母粉验收标准
配制称量时，一般将不溶或难溶物质（如酵母粉等）和易溶解物分开称，根据母瓶培养基配方称取所需葡萄糖和酵母粉重量，葡萄糖用蒸馏水溶解，酵母粉直接按配比分装于三角瓶内。
～，按每瓶100mL的量分装于500mL直口三角瓶内，塞好棉塞，用双层纱布扎口后，再用牛皮纸扎口，放置在不锈钢筐中，盖上牛皮纸，准备消毒。
将准备好的不锈钢筐放在消毒车上推入消毒柜内，按蒸汽消毒柜使用方法用蒸汽消毒，119～121℃，保温30分钟，接种用具保温60分钟并填写《母瓶配制记录》和《培养基接种用具消毒记录》。
母瓶接种及培养
母瓶接种由两人操作，一人为主操作子斜面，一人为辅操作母瓶，主操作用接种铲取孢子于茄氏瓶中，一支铲子只能用于一只子斜面，将3～5支子斜面的孢子接入装有80mL无菌水的带玻璃珠三角瓶中，放置摇床上180～220转/分钟摇10～15分钟制成孢悬液。
用10mL吸管吸取5mL孢悬液接种于母瓶，接种后塞上棉塞，包扎纱布，置180～220转/分摇床上，28±1℃培养44～50小时左右，待菌丝长好后取下，准备并瓶。
并瓶前应按5%的比例对母瓶进行抽查，观察菌丝的外观，测定菌浓和PH，并进行镜检，合格后才可并瓶。
母瓶进罐前，要在无菌条件下并瓶，一般情况下10～12瓶合并为一个种瓶，约1000～200mL。
种瓶并好后，将瓶口包扎纱布和牛皮纸，等待进罐，若母瓶不进罐，并瓶后应置于2～8℃冰箱保存，期限不超过2天。
并瓶后，每五个三角瓶残液并为一瓶，接种于肉汤培养基中做无菌试验；在接种小罐后将种瓶中的残液接种于肉汤培养基中做无菌试验，将肉汤培养基放置36～38℃培养间培养，观察变化情况，作为一种无菌监测，为事后分析作准备。
在发酵水平出现连续异常时，应对母瓶摇瓶进行跟踪实验。
母瓶菌丝质量标准
外观
浅黄色至棕黄色、刺球状或花状。
菌浓
不小于25%。
菌丝阶段
Ⅱ～Ⅲ阶段。
PH ～。
镜检
没有污染杂菌。
小罐接种操作
本工艺采用菌丝进罐和倾倒式接种法