【精品】PPT课件 蛋白质含量的测定—微量凯氏定氮法.ppt

文档介绍：蛋白质含量的测定
—微量凯氏定氮法
王冬亮讲师
87330724
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二、实验原理:
1. 氮元素:
蛋白质区别于糖和脂肪的特征,
绝大多数蛋白质的氮元素含量相当接近,一般恒定在15~17%,平均值为16%左右。

只要测定出生物样品中的含氮量,再乘以相应的蛋白质换算系数(、),就可以计算出样品中的蛋白质含量。
消化
蒸馏
吸收
滴定
2. 含氮量的测定
先高温条件下强酸(浓H2SO4)把样品中的蛋白质的有机氮全部消化为无机氮形式
再强碱高温水蒸气蒸馏出氨气
用硼酸吸收氨气
用标准盐酸进行滴定
反应方程式
(二)蒸馏、吸收
微量凯氏定氮蒸馏装置
传统装置
1:电炉
2:水蒸气发生器
3:螺旋夹
4:小玻杯及棒状玻塞
5:反应室
6:反应室外层
7:橡皮管及螺旋夹
8:冷凝管
9:蒸馏液接收瓶
三、试剂(已制备)
1、消化液:硫酸
2、催化剂:硫酸铜、硫酸钾
3、碱溶液:40%氢氧化钠
4、吸收液:2%硼酸
5、混合指示剂:
%甲基红乙醇溶液:%甲基蓝乙醇溶液=(1:1)
6、标准滴定液: HCL
半自动凯氏定氮仪
1、确保仪器运行正常、管道内部干净、管道及其连接口密封性好
2、准备好吸收液(200ml 2%硼酸+ 2ml 混合指示剂)并做好标记
3、将碱溶液及去离子水桶与仪器连接好,放入盛装消化好样品的消化瓶,放入盛装吸收液的锥形瓶并保证管口插入液面下。
4、设置并启动程序
程序设置:
步骤
加碱或加水
时间
蒸馏
时间
C0(样品检测)
E0(加碱)
5s
E0
4min
C1(样品间清洗)
E1
0s
E1
2min
C2(试验结束后第一次清洗)
E2(加水)
20s
E2
0min
C3(试验结束后第二次清洗)
E3(加水)
10s
E3
4min
(三)滴定:
至灰色或蓝紫色
至灰色或蓝紫色
终点
至灰色或蓝紫色
X:样品蛋白质含量(g/100g 或g/100mL)
V1、V2:测定用样、试剂空白消耗盐酸标准溶液的体积(mL)
C:盐酸标准液的摩尔浓度(mol/L)
:1mol/L盐酸标准液1mL相当于氮的克数
m:样品质量(g)或体积(mL)
F:
五、结果计算:
作业
实验报告的撰写:
实验题目
实验原理
实验结果(空白滴定的结果可以共享)
实验讨论(操作中现象的出现原因;结果的影响因素;与商标上显示的结果对比等。)
结果每个小组可以相同,但是讨论不能相同!