文档介绍：缩略语
AS Atherosclerosis 动脉粥样硬化
sLDL small dense low density lipoprotein 小颗粒低密度脂蛋白
ox-LDL Oxidized low density lipoprotein 氧化低密度脂蛋白
HUVEC Human umbilical vein endothelial cell 人脐静脉内皮细胞
CAMs Cell adhesion molecules 细胞粘附分子
ICAM-1 Intercellular adhesion molecule-1 细胞间粘附分子
VCAM-1 Vascular cell adhesion molecule-1 血管细胞粘附分子
ELISA Enzyme linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附反应
PCR Polymerase Chain Reaction 聚合酶链反应
RT Reverse Transcription 反转录
GAPDH Glyceraldehyde-3-phosphate 甘油醛-3-磷酸脱氢酶
dehydrogenase
FBS Fetal Bovine Serum 胎牛血清
DMEM o’s Modification of Eagle’s o 改良 Eagle
Medium 培养基
DMSO Dithiothreitol 二甲基亚砜
EB Ethidium Bromide 溴化乙锭
DEPC Diethyl Pyrocarbonate 焦碳酸二乙酯
PBS Phosphate Buffered Saline 磷酸盐缓冲液
EDTA Ethylene etracetic Acid 乙二胺四乙酸
DDW Double Distillation Water 双蒸水
MTT Methyl thiazole 噻唑蓝
HPLC High performance liquid 高效液相色谱法
hromatography
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中文摘要
小颗粒低密度脂蛋白的分离鉴定及其
对血管内皮细胞 ICAM-1 表达的影响
[目的]:近年来大量流行病学及临床研究表明小颗粒低密度脂蛋白
(sLDL)与动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)和冠心病的发生、发展和
病变程度具有显著的相关性。OxLDL 可以显著刺激粘附分子的表达已得到
证实,但 sLDL 与粘附分子表达的关系尚未见明确报道。本研究通过观察
sLDL 对血管内皮细胞间粘附分子(ICAM-1)表达的影响,以期从 AS 病
变形成的早期的关键环节探讨 sLDL 致 AS 的分子机制。
[方法]:(1)采用两步超速离心法分离 sLDL, 油红“O”染色及负染电
镜鉴定脂蛋白及其颗粒大小。(2)BCA 法测定 sLDL 的蛋白浓度、生化法测
定过氧化物质(MDA)和总抗氧化能力,HPLC 测定β-胡萝卜素、维生素 E
(VitE)。(3)生化法动态观察 sLDL 刺激内皮细胞后细胞液的 MDA 变化。
(4)体外培养人脐静脉内皮细胞系,光镜观察 sLDL 对内皮细胞形态的影响。
(5)MTT 方法观察 sLDL 刺激后细胞生长变化。(6)采用细胞酶联免疫吸
附法(ELISA)测定 sLDL 刺激后细胞表面 ICAM-1 蛋白表达。(7)TRIZOL
法提取细胞核糖核酸(RNA),逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)检测 ICAM-1
mRNA 水平。
[结果]:(1)分离的 LDL 经油红“O”染色条带清晰、纯度较好,负染
电镜鉴定其颗粒<。(2)sLDL 与 lLDL(large LDL)相比较,丙二醛
(malondialdehyde,MDA)显著增高(± vs ±, P<),
sLDL 中β-胡萝卜素(± vs ±, P<)、VitE
(± vs ±,P<)和总抗氧化能力显著降低
(± vs ±, P<)。(3)动态观察随 sLDL 加入细胞液
后 MDA 含量随时间而增加。(4)光镜观察,sLDL 对内皮细胞形态未见明
显影响。(5)MTT 还原测定结果显示 sLDL 刺激后细胞活性无明显差异。(6)
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sLDL 组与 lLDL 组相比细胞表面 ICAM-1 蛋白水平的表达显著增加
(± vs ±