文档介绍：酶联免疫吸附实验(E nzyme- L inked I mmuno S orbent A ssay , ELISA ) 一种固相酶免疫测定技术,利用酶标记的抗原或者抗体,在固相载体上定量或定性测定特异性抗体、可溶性抗原及细胞表面抗原。 1971 年由瑞典学者 Engrall 和Perlmann, 荷兰学者 weeman 和Schuurs 报道; 开创了运用酶标记免疫技术进行液体标本中微量物质测定的实验方法; ELISA- 测抗原( Ag)或抗体( Ab)三要素?抗原或抗体的固相化:已知的 Ag/Ab 结合到固相载体表面,并保持其免疫活性; ?抗原或抗体的酶标记:酶标 Ag/Ab, 并保持其免疫活性和酶活性; ?底物显色: 底物被酶催化成为有色产物—定性和定量–放大免疫反应的信号基本原理基本原理?高度特异性:保持抗原抗体反应的特异性?高灵敏度:酶催化底物显色的高效性, pg 水平微量检测?定性定量检测:反应液颜色深浅或光密度值基本特点基本类型基本类型?抗体测定法?间接法检测特异性抗体?抗原测定法?直接竞争法检测可溶性抗原?双抗体夹心法检测可溶性抗原(改良双抗体夹心法检测可溶性抗原) ?应用生物素-亲和素双抗体夹心 ELISA 法基本类型基本类型?抗体测定法?间接法检测特异性抗体?抗原测定法?直接竞争法检测可溶性抗原?双抗体夹心法检测可溶性抗原(改良双抗体夹心法检测可溶性抗原) ?应用生物素-亲和素双抗体夹心 ELISA 法显色显色间接法检测特异性抗体包被已知抗原与待测抗体孵育与酶标抗体孵育加入底物包被已知抗原优点: : 可重复性差通常用于抗体效价的检测和某些疾病的早期诊断基本类型基本类型?抗体测定法?间接法检测特异性抗体?抗原测定法?直接竞争法检测可溶性抗原?双抗体夹心法检测可溶性抗原(改良双抗体夹心法检测可溶性抗原) ?应用生物素-亲和素双抗体夹心 ELISA 法直接竞争法检测可溶性抗原原理: 待检抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合;待检抗原含量愈多,结合在固相上的酶标抗原愈少,最后的显色也愈浅。优点: ?待检抗原只需要一个抗原决定簇,适合小分子抗原,如,激素,药物等; ?操作步骤简单快捷,只需要一个保温洗涤过程缺点: ?酶标记抗体用量大; ?定量检测的灵敏度和重复性存在不足。