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水仙组织培养方案.docx

文档介绍

文档介绍:水仙组织培养方案
实验目的:
了解植物组织培养的概念,认识植物组织培养的特点和类型;了 解植物组织培养技术在现代经济发展中的应用。
实验原理:
植物组织培养的理论依据是植物细胞具有全能性,所谓细胞全能 型是指植物体任何一个细胞都携带水仙组织培养方案
实验目的:
了解植物组织培养的概念,认识植物组织培养的特点和类型;了 解植物组织培养技术在现代经济发展中的应用。
实验原理:
植物组织培养的理论依据是植物细胞具有全能性,所谓细胞全能 型是指植物体任何一个细胞都携带者一套能发育成完整植株的全部 遗传信息。在立体培养的情况下,这些信息可以表达,产生出完整的 植株。一些已经分化的细胞可以通过脱分化产生愈伤组织。该组织是 一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团,经过进一步分化培 养,则可生出完整的小植株。
实验步骤:
1、 接种
选取一年生或两年生鳞茎为材料,去掉干枯鳞叶与鳞茎盘,在相对无 菌的条件下层剥鳞叶,再把鳞叶切掉4/5,仅留鳞叶基部及相连的部 分鳞茎盘,最后纵切成长约2mm,宽约1mm的组织块直接接种于培养 基上。每支试管接种两块,置培养箱培养。
2、 诱导愈伤组织
用鳞叶基部作为外植体诱导愈伤组织,在上述MS培养基中加入1
0mg/mL 6- mg/mL ,两周后形成愈伤组织。
我们通常配制1L的MS诱导愈伤培养基中加入30g蔗糖,12g琼脂, 800uL 1M NaOH 调节 pH 至 左右,加入 800 uL 6-BAP 和 ,分装20瓶,高压灭菌20min,冷却凝固后放置1-2天, 无污染出现后即可使用。将组织块、愈伤诱导培养基、镊子和刀片、 酒精瓶(泡镊子)、大培养皿和废液瓶等全部放入超净台灭菌20min, 开始进入超净台进行如下操作:
(1) 首先将组织块切至培养皿的滤纸中,将组织块四周的边缘全部 切去以造成愈伤,将愈伤的组织块分别切成小片(大小3-5mm左右)。
(2) 然后将配制的诱导培养基中残余的水分倒掉,再分别用镊子将 组织块接种至培养基中,注意要将叶背面和培养基充分接触,用镊子 轻摁一下,防止掉落,每瓶接6-8个左右。为了减少污染,建议每接 两瓶更换一次滤纸,操作人员勿离开超净台,直至将组织块全部接至 愈伤诱导培养基中。
3、愈伤组织继代
将诱导的愈伤组织继代两次,两周后进行取样。继代两次的主要原因 是将愈伤组织中残留的鳞叶切除干净,继代两次后的愈伤组织完全不 含有鳞叶且大小合适取样。