文档介绍：第十章、动物细胞融合与单克隆抗体
第一节、动物细胞融合一、动物单个细胞的获得
动物细胞虽然没有细胞壁,但细胞间的连接方式多样而复杂,在进行有效的细胞融合之前,也必需获得单个分散的细胞。
组织的获得
采用各种适宜的方法处死动物,取出组织块放入小烧杯中,用剪刀将组织块剪碎成1mm3大小,用吸管吸取Hanks溶液冲下剪刀上的碎块,补加3-5ml的Hanks溶液,用吸管轻轻吸打,低速离心,弃去上清液,留下组织块。
组织的消化
通过生物化学的方法将剪碎的组织块分散成细胞团或单细胞。根据不同的组织对象采用不同的酶消化液。如最常用的有胰蛋白酶和胶原酶等。其他的酶如链霉蛋白酶、粘蛋白酶、蜗牛酶等也可用于动物细胞的消化。EDTA最适合消化传代细胞,常与胰蛋白酶使用。
胶原酶消化
是一种由细菌中提取的酶,对胶原和细胞间质有较强的消化作用,适用于消化纤维组织、上皮组织、癌组织等。
(1)向培养瓶中放入1-5mm3大小的组织块,加5ml2000单位/ml的胶原酶干液,最终浓度为200单位/ml,pH=。
(2)℃水浴4-48小时,无需摇动,中间可更换酶液一次。
(3)当组织变软,分散于瓶底时,轻轻震荡即散成细胞团或单个细胞,小心倒出培养液。
(4)800r/min离心5分钟,弃上清液,重新悬浮BSS溶液中,再离心一次。
(5)加入培养液制成细胞悬浮液。
二、细胞融合的方法
对照课本和植物细胞融合方法,自学这部分内容。
三、杂种细胞的筛选
原理:两种亲本细胞融合的混合物中可能有多种类型细胞,筛选的目的是获得优良的杂种细胞。
1)亲本
2)同核体:同源原生质体的融合体
3)异核体:非同源的原生质体的融合体
4)多核体:含有双亲不同比例核物质的融合体
5)异胞质体:具有不同胞质来源的杂合细胞。
6)核质体:有细胞核而带有少量细胞质的亚原生质体
动物细胞的筛选方式:
1)利用抗药性筛选系统:利用生物细胞对药物敏感性差异筛选杂种细胞。
亲本A:对氨苄青霉素敏感,对卡娜霉素不敏感
亲本B:对卡娜霉素敏感,对氨苄青霉素不敏感
杂种细胞可以在含有两种抗生素的培养基上生长
2)营养互补筛选系统:细胞在缺乏一种或几种营养成分时,不能生长繁殖,即营养缺陷型细胞。利用两种亲本细胞营养互补作用原理可以筛选杂种细胞。
亲本A:色氨酸缺陷型
亲本B:苏氨酸缺陷型
杂种细胞可以在不含色氨酸和苏氨酸的培养基上培养,而亲本细胞均会死亡。