文档介绍：基因标准表达谱测序
基因标准表达谱测序
基因标准表达谱测序
基因表达谱测序
背景介绍
基因表达谱解析利用HiSeq2000高通量测序平台对mRNA进行测序，获取10M读长为
49nt的原始read基因标准表达谱测序
基因标准表达谱测序
基因标准表达谱测序
基因表达谱测序
背景介绍
基因表达谱解析利用HiSeq2000高通量测序平台对mRNA进行测序，获取10M读长为
49nt的原始reads，每一个reads可以对应到相应的转录本，进而研究基因的表达差别状况。与转录组测序对照，基因表达谱解析要求的读长更短，测序通量更小，仅可用于基因表达差
异的研究。该方法拥有定量准、可重复性高、检测阈值宽、成本低等特色，能很好的代替过去的数字化表达谱解析。
技术路线
RNA提取
提取并纯化mRNA
mRN***段化
反转录成cDNA
成立IlluminaSE文库
上机测序
生物信息学解析
生物信息学解析
基因标准表达谱测序
基因标准表达谱测序
基因标准表达谱测序
原始数据办理
标准生物信息解析
原始测序数据
有效数据统计去除接头和质量剪切
表达谱mapping至参照图谱
解析表达差别
基因标准表达谱测序
基因标准表达谱测序
基因标准表达谱测序
高级生物信息解析GO和KEGG差别基因表达
富集解析模式聚类
送样要求
样品要求
1.
所需TotalRNA的量均很多于20μg/文库，TotalRNA
可以保存在DEPC办理过的水中、
75%的乙醇、异丙醇中，详尽以什么方式保存请注明。
2.
如供给实验资料为动物组织资料，样质量量需大于
2g；
3.
如供给实验资料为植物样品，样质量量需大于
4g；
如供给实验资料为培育细胞，请供给1×107培育好的细胞；
如供给实验资料为血液样品，请供给≥2ml的样品。
我们强烈建议在送样的同时客户做好备份，以备后续实验之用。
样品纯度要求
-，RNA无降解、28S和18S核糖体RNA条带特别亮且清楚（其
基因标准表达谱测序
基因标准表达谱测序
基因标准表达谱测序
大小决定于用于抽提RNA的物各种类），28S的密度大体是
仪解析RNA完好性数据RIN≥8。
18S的
2倍；Agilent2100
检测
基因标准表达谱测序
基因标准表达谱测序
基因标准