文档介绍：一种便携快速检测赭曲霉***a的方法
一种便携快速检测赭曲霉***a的方法
本发明公开了一种便携快速检测赭曲霉***A的方法。首先制备蔗糖转化酶-端炔修饰DNA。随后将生物素-叠氮修饰DNA结合在磁珠表面，并加入不同浓度的赭曲霉***A混合。然珠表面的叠氮修饰DNA-赭曲霉***A溶液；
?步骤3中反应所得的叠氮修饰DNA-赭曲霉***A溶液， μ?步骤
I中所得的蔗糖转化酶-端炔修饰DNA溶液、 μ? mM CuSO4溶液、 μ? mM抗坏血酸溶液，在室温下培育10分钟，让抗坏血酸还原Cu(II)得到Cu(I)化合物，催化蔗糖转化酶-端炔修饰DNA与磁珠表面的叠氮修饰DNA-赭曲霉***A发生点击化学反应，得到蔗糖转化酶修饰磁珠溶液；
，对步骤4中所得到的蔗糖转化酶修饰磁珠溶液采用磁铁进行第二次分离，得到第二次上层清液；取10 μ?第二次上层清液， μ? M蔗糖溶液，在室温下反应20分钟， μ?溶液至血糖仪试纸上，采用血糖仪进行测量，绘制所测数据在不同赭曲霉***A浓度条件下的变化趋势图，根据该图就能检测赭曲霉***A的浓度。
[0006]其中:
步骤I中所述的巯基-端炔修饰DNA的`序列从5’到3’端为:5’ -炔基-AAA AAA AAAAAA-巯基-3’。
[0007]步骤2中所述的生物素-叠氮修饰DNA的序列从5’到3’端为:5’ -生物素-GATCGG GTG TGG GTG GCG TAA AGG GAG CAT CGG ACA-叠氮-3，。
[0008]当溶液存在赭曲霉***A时,赭曲霉***A能与生物素-叠氮修饰DNA进行结合，引起DNA链构象发生变化，促使叠氮基团紧靠磁珠表面，并产生空间位阻效应，导致生物素-叠氮修饰DNA不能与蔗糖转化酶-端炔修饰DNA发生点击化学反应，致使蔗糖转化酶不能有效地结合在磁珠表面，而是处于上层清液中。因此，取第二次上层清液进行检测时，蔗糖转化酶能有效催化步骤5溶液中的蔗糖转化为葡萄糖。采用血糖仪测定该反应溶液时，数值较高。并且随着赭曲霉***A浓度增加，血糖仪数值逐渐增大，达到检测赭曲霉***A的目的。
[0009] ng/mL~ ng/mL的浓度范围内对赭曲霉***A的检测呈现良好的线性响应，检测限约为73 pg/mL，远低于赭曲霉***A在谷类物质中的最高限量标准。此外，血糖仪试纸上的圆斑颜色随着赭曲霉***A浓度的增加逐渐由黄色变为绿色，而且能直接用肉眼观测到该过程。
[0010]本发明的显著优点在于:
(I)本发明结合点击化学反应速度快的优势以及适配体特异性高的特点，大大降低了操作的复杂性，提高了灵敏度和选择性。[0011 ] ( 2 )本发明的操作过程都是在室温下进行，反应条件温和，容易控制。
[0012](3)本发明采用简单、小巧的血糖仪进行数据采集，降低了检测成本，而且便于携带，适合现场适时检测。
[0013](4)本发明在用于赭曲霉***A的检测过程中，能直接用肉眼观测到试纸上的圆斑颜色随着赭曲霉***A浓度的增加逐渐由黄色变为绿色的过程，显示出高效、简单的优势。
[0014]【专利附图】
【附图说明】:
图1为本发明的便携快速检测赭曲霉***A方法的原