文档介绍：实验1：
大肠杆菌的培养和分离
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微生物包括哪五类：
病毒
细菌
放线菌
真菌
原生生物
特点：结构简单,，：使用较温和理化因素，仅杀死物体表面或内
部的一部分对人体有害的微生物的过程。不能杀死
芽孢和孢子。
灭菌：使用强烈的理化因素消灭物体内外所有微生
物，包括芽孢和孢子。
各种器具
培养基
转移菌种
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比较消毒与灭菌
比较项
理化因素的作用强度
消灭微生物的数量
芽孢和孢子能否被消灭
消毒
灭菌
较为温和
部分生活状态
的微生物
不能
能
全部微生物
强烈
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高压蒸汽灭菌
（湿热灭菌）
洒精灯灼烧灭菌
干热灭菌
（1）灭菌方法：
3、常用的灭菌和消毒的方法
培养基、无菌水、
各种耐高温的玻璃金属器具
100kPa、121 ℃下维持15-30min
需要保持干燥
耐高温的玻璃金属器皿
160-170 ℃下加热1-2h
接种环等金属器具
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1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min
2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min
3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;***气消毒水源
4、紫外线消毒
……
(2)消毒的方法：
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请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。
如果需要，请选择合适的方法。
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿
（2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管
（3） 实验操作者的双手
答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。
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（一）制备LB培养基（通用的细菌培养基）
1、配方：，，
***，水50ml
（配固体培养基再加琼脂1克）
溶解
计算称量
调pH
分装
加塞，包扎
2、流程
二 操作步骤
灭菌
倒平板
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①分装：注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，因此在将培养基转移到三角瓶或试管中时必须用__________。
②加塞：试管用塑料盖或________；三角瓶口用_______或_________封口,再用_________或报纸封口。
③包扎：用________或报纸
三角漏斗
棉花塞
封口膜
6层纱布
牛皮纸
牛皮纸
高压蒸气灭菌法
④灭菌
1）加水：
2）装锅：
向外层锅内加入适量的水，加水的要求是_________.
物品放置的要求______________________：
加盖：将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的_______内。
再以________方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺
栓松紧一致，勿使漏气。
不触及内胆
整齐、稳定、留出空隙
排气槽
两两对称
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3）加热排气：
4）保温保压：
5）出锅：
打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的
_______。_________________后，关上排气阀。
当锅内压力升到_______kg/cm2时，控制
热源，维持压力至______min。
切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压
力降至____时，打开________，旋松螺栓，打开
盖子，取出灭菌物品。
冷空气
待冷空气完全排尽
0
1
15
排气阀
否则会因锅内压力较高，打开气阀后造成的压力差
可能使容器内的培养基喷溅造成棉塞沾染培养基而
发生污染，甚至使容器爆炸。
灭菌后，通常将实验用具放入60℃~80 ℃_____
中烘干，以除去灭菌时的水分，避免引起_____。
烘箱
污染
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倒平板：待培养基冷却至_____ ℃时，将每只培养皿倒入_________ml未凝固的固体培养基，置于_____位置上，轻轻晃动使其均匀铺满平皿底部，待凝，使之形成平面。_______备用。
制斜面：将未凝固的固体培养
基的试管____放，冷却待凝使即
成为斜面。
６０
10～12
水平
倒置
斜
⑤倒平板、制斜面
操作平台：
灭菌好的培养基和实验器具置于超净台上打开_________和___________，灭菌30min.
过滤风
紫外线
超净台
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思考题：
A、操作过程中避免带入杂菌的方法有哪些？
1、灭菌后的培养基、器具置于超净台上，并打
开超净台的紫外灯和过滤风，灭菌30分钟。
2、用镊子夹出洒精棉球擦拭桌面和实验者双手。
3、整个操作在酒精灯火焰旁进行
4、打开后或加塞前试管口、三角瓶口灼烧灭菌。
B、培养基灭菌后，需要