文档介绍：感染性疾病分子诊断演示文稿
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（优选）感染性疾病分子诊断
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第十章感染性疾病的分子诊断
分子诊断（molecular diagnosis）是指通过检测基因的定为负链；短链(S)为正链，5’末端固定，3’末端位置不固定，S正链的长度可为L负链的50~100%，因而在病毒群体中出现不同长度的正链与全长的负链匹配，故仅有部分基因组长度为双链。HBV基因组L链上至少有4个ORF，分别称为S、C、P和X，编码外膜蛋白、核壳蛋白、聚合酶和X蛋白。 kb基因组序列的利用率高达150~200%。
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（二）分子诊断方法
1．PCR

2. 支链DNA技术
3. 核酸杂交
4. 基因芯片技术
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逆向斑点杂交法
原理就是将各种探针固定在基质上, 用以检测受检的各种标记样品中与探针互补的核酸物质的变化。
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FeO/ Au 纳米颗粒探针法
近年来, 通过纳米表面结合寡核苷酸构成纳米颗粒基因探针, 用于检测靶脱氧核糖核酸。其原理是利用DNA 碱基严格互补配对的特性设计的, 主要应用于分子的组装。
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聚合酶链反应- 限制性片段长度多态性法
该法利用错配PCR 的原理扩增HBV 前C 区长194 bp,C 启动子区长184 bp 的基因片段, 扩增产物分别经限制性内切酶Bsu 361, Bc1I 酶切, 琼脂糖凝胶电泳, 根据酶切图谱多态性, 建立检测HBV 前CA1896, BCPT1762/ A1764双变异的方法,
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乙型肝炎病毒DNA 等温扩增技术
HBV 的病毒载量与感染状态密切相关, 寻求快速、简便、灵敏、特异的定量手段是对HBV 早期诊断、病程监控及流行病学调查的需求。
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（三）临床意义
1．HBV感染的早期诊断
2. 监测治疗效果
3. 判断病情，指导制订合理的治疗方案 HBV DNA定量检测是判断病毒复制情况的指标。HBV DNA拷贝数越高，病毒复制越厉害，传染性越强，肝脏病理损害程度越高，肝组织炎症反应越重。
4. 在乙型肝炎病毒耐药检测中的应用
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HBV DNA 检测是乙肝病毒抗病毒治疗的有效监测指标。乙肝病毒药物治疗后, HBVDNA 含量持续下降, 然后持续在低水平, 或低至方法学能检出的含量( 测定下限)以下, 则说明治疗有效。观测抗病毒药物治疗效果不能凭两三次检测结果来判断, 必须多次动态观察, 每次检测的间隔天数不宜太短, 一般为两周以上。可采用以检测次数为横坐标, HBV DNA 量为纵坐标作图的方法来判断血清HBV DNA 量的变化趋势, 进而判断抗病毒治疗是否有效。血循环中HBV DNA 浓度与HBsAg 和HBeAg 有一定的相关, 但其浓度间并不呈正线性相关。
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拉米夫定作为新一代核苷类高效抗乙肝病毒药物，可迅速降低HBV-DNA的浓度，改善肝脏组织的病变，还可能阻止纤维化的进程，终止肝硬化的发展，尤其是拉米夫定不受人种、病毒感染的模式、野生型或基因组前C区突变的影响。该药与干扰素合用有协同作用。
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长期服用拉米夫定会引起HBV基因突变而造成耐药，其中95%是由于HBV基因组P区中高度保守的YMDD功能区（Y酪氨酸—M甲硫氨酸—D天冬氨酸-- D天冬氨酸）发生突变：第552位甲硫氨酸（M）被缬氨酸（V）或异亮氨酸（I）代替，突变后的HBV称为YVDD变异株和YIDD变异株。由于变异造成基因组核苷酸与DNA多聚酶的结合能力有降低，通常变异株的复制能力低于野生株。当停止应用拉米夫定治疗后，野生株通常会替代变异株。
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HBeAg 阳性的标本,HBV DNA 通常有较高的浓度, HBeAg 阴性、抗HBe 阳性的标本, HBV DNA 浓度通常较低。当HBV 基因组前C 区发生突变时, 则可出现HBeAg 阴性而HBV DNA 仍保持在较高的浓度。单独抗HBc 阳性的血液HBVDNA 浓度通常很低。
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关于血液中HBV DNA 浓度与患者传染性之间的关系, 如血清中HBV DNA 浓度大于109 拷贝/ ml, 则在日常生活密切接触中即具有较强的传染性。105~ 106 拷贝/ ml,则在日常生活密切接触中的传染性较小。小于105 拷贝/ml, 则日常生活密切接触中几乎没有传染危险性。但不管HBV DNA 的浓度为多少, 哪怕是低于相应PC