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感染的慨念
感染是病原体和人体之间的相互作用过程
病原微生物:致病菌(条件致病菌)
微
生
物
人
体
微
生
物
人
体
不
同
的
感
染
状
态
共
生
状
态
在正常情况下,人体的一些腔道和体表均有微生物寄生
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感染性疾病:由某种病原体所致,通过不同方式引起人体发生感染并出现临床症状的疾病。
病原体:病毒、细菌、原虫、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体、寄生虫
。
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常规检测方法:
免疫学方法
微生物学方法
受敏感性、特异性限制,不易早期诊断,并且不易提供病原体分型及耐药性方面的信息。
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感染性疾病的分子诊断策略
一般性策略(检出病原体):
判断有无感染
是何种病原体感染
常用方法:PCR+杂交
完整性策略:
检出病原体
分型(分类)-亚型-耐药性
常用方法:杂交、PCR、基因芯片、DNA测序
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感染性疾病分子诊断标志物
病原体核酸分子(DNA/RNA)
基因表达产物
代谢物
免疫应答分子
细
胞
免
疫
体
液
免
疫
T
T
致敏T细胞
淋巴因子
B
浆细胞
IgM
IgG
IgA
IgD
IgE
感染早期出现
临近恢复期出现
与原虫和蠕虫感染有关
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二、感染性疾病分子诊断的常用方法
根据目的基因是否被放大,可分为杂交法和扩增法。
信号放大技术检测方法
靶分子数目不变,而检测的探针信号放大
采用多酶、多探针或二者结合等方法来增加探针标志物的浓度使检测信号得到放大。
靶分子扩增技术检测方法
靶分子(RNA、DNA或探针)的扩增
PCR、替代扩增、LCR等
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引物A
靶RNA
引物B
RNA
cDNA
RT
3'
5'
5'
5'
3'
5'
3'
5'
3'
cDNA
cDNA模板
5'
5'
3'
3'
5'
3'
引物B
RNAseH
RT
T7RNA聚合酶
100-1000RNA扩增子
5'
3'
5'
3'
3'
5'
3'
5'
引物A
3'
5'
5'
RNAseH
RNA
RNA
cDNA
cDNA
图8-3NASBA原理示意图
引物A5’端带有T7RNA聚合酶结合位点,3’端碱基与靶RNA3’端序列互补;引物B的碱基序列与cDNA3’端序列互补
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nucleicacidsequence-basedamplification(NASBA)
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NASBA的特点为操作简便,不需特殊仪器,不需温度循环。整个反应过程由三种酶控制,循环次数少,忠实性高,其扩增效率高于PCR,特异性好。
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