文档介绍：dna电泳实验报告杨家庆
dna电泳实验报告杨家庆
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dna电泳实验报告杨家庆
浙江农林大学
实验室开放工程
DNA和蛋白质的电泳技术
姓名：杨家庆
班级：测绘工程2℃、30ｓ；
４、重复步骤３，共循环 35次；
５、循环过程结束，在 72℃下保存８min；
６、制作琼脂糖凝胶，将样品与５微升 loadingbuffer 溶液混合，
上样，进行电泳；
７、将胶移入凝胶成像仪，用紫外光观察，拍照存档，保存图片；
８、清理实验相关物品，整理实验器材，实验结束。
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六、实验结果：
标准DNA上样后成像为〔如下左图〕：从上到下六条分带分别代表不
同大小的DNA分子片段，带的粗细表现该片段的含量的多少，如图，
从上到下每个条带一次对应的 DNA分子片段的大小为:2000bp、
1000bp、750bp、500bp、250bp、100bp。凝胶回收后，各个不同片段
的条带与MARKER带的比照成像为〔如下右图〕，其中，最亮的条带对
应的DNA量是150ng,其余的均为50ng
PCR实验结果成图为
七、结果讨论:
影响实验结果的因素有：
实验过程中仪器操作不当；
实验过程中液体漏加或加错；
电泳时电场强度以及电泳液的导电性能的影响；
实验中所需溶液不同浓度所带来的影响；
上样时在注入样品的过程中没有成功注入；
凝胶成像仪使用不当等。
八、实验感想和建议 :
通过一学期的实验，我越发的明白实验操作对于结果的重要性。实验操作可以说是实验成功与否的关键局部，可是马虎不得。对于需要团队合作的实验，个人认为要有强势的人员伙伴，不说是精通
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实验操作规程，最少也得知道实验的根本操作，掌握要做实验的操作
方法，这对于后续的实验无疑是与决定性作用的。对于个人的实验能
力，关键还是要看平时的积累，有些实验操作繁琐复杂，需要极大的
耐心，这些都应该是逐渐培养起来的。
通过这次实验的学习，使我学到了不少实用的知识,更重要的
,做实验的过程,思考问题的方法,这与做其他的实验是通用的，加
强了我的动手能力，并且培养了我的独立思考能力，使我受益匪浅.
通过这次实验的学习，我学到了很多，得到了很多，有些是书本上学不到的，只有自己参与了，操作了，才会知道。也要感谢老师对我们的照顾。
蛋白质的电泳实验
一、实验名称：蛋白质的电泳技术〔SDS-PAGE电泳〕
二、实验目的：学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS—PAGE)测定
蛋白质的分子量的原理和根本操作技术。
三、实验原理：
蛋白质是两性电解质，在一定的 pH条件下解离而带电荷。当溶
液的pH大于蛋白质的等电点(pI)时，蛋白质本身带负电，在电场中
将向正极移动；当溶液的pH小于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电，
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在电场中将向负极移动；蛋白质在特定电场中移动的速度取决于其本身所带的净电荷的多少、蛋白质颗粒的大小和分子形状、电场强度等。聚丙烯酰胺凝胶是由一定量的丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合而成的三
维网状孔结构。本实验采用不连续凝胶系统，调整双丙烯酰胺用量的多少，可制成不同孔径的两层凝胶；这样，当含有不同分子量的蛋白质溶液通过这两层凝胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移
率。由于上层胶的孔径较大，不同大小的蛋白质分子在通过大孔胶时，
受到的阻滞根本相同，因此以相同的速率移动；当进入小孔胶时，分
子量大的蛋白质移动速度减慢，因而在两层凝胶的界面处，样品被压
缩成很窄的区带。这就是常说的浓缩效应和分子筛效应。同时，在制
备上层胶(浓缩胶)和下层胶(别离胶)时，采用两种缓冲体系；上层胶
pH=—，下层胶pH＝；Tris—HCI缓冲液中的Tris用于维持溶液的电
中性及pH，是缓冲配对离子；CI-是前导离子。在时，缓冲液中的Gly-
为尾随离子，而在 pH＝时，Gly的解离度增加；这样浓缩胶和别离胶
之间pH的不连续性，控制了慢离子的解离度，进而到达控制其有效
迁移率之目的。不同蛋白质具有不同的等电点，在进入别离胶后，各
种蛋白质由于所带的静电荷不同，而有不同的迁移率。由于在聚丙