穿心莲内酯衍生物的急性毒性实验.doc

文档介绍：1 穿心莲内酯衍生物的急性毒性实验作者:张越华,曾和平, 陈东风【摘要】目的运用生物活性指纹图谱预测其它中药能否促进骨髓间充质干细胞( bone marrow mesenchymal stem cells,bMMSCs ) 。方法龟版浸膏依次用石油醚、***、二***甲烷提取,得到溶剂提取物,用 MTT 比色法及流式细胞仪器研究了溶剂提取物干细胞活性,采用 GC-MS 技术研究每一个提取物, 根据总离子流色谱图的相同保留时间和相应峰面积, 获得龟版浸膏 GC-MS 生物活性指纹图谱。结果初步结果表明溶剂提取物均能促进鼠 bMMSCs 的体外增殖,用龟版浸膏 GC-MS 生物活性指纹图谱来预测中药“四物汤”的干细胞活性, 预测准确率达 % 。结论用这种方法来预测未知中药样品的干细胞活性,有一定的可靠性。【关键词】龟版; 干细胞; 增殖; 气相色谱- 质谱联用分析;指纹图谱 Abstract : ObjectiveTo predict the promoting effect of 2 Chinese medicine on proliferation of rat bone marrow mesenchymal stem cells(bMMSCs) by bioactivity fingerprint in ointment of plastrum testudinis was extracted by petroleum ether,ether and dichloromethane in burn to gain the effects on the proliferation of bMMSCs were examined by MTT assay and flow cytometry analysis, and each sample was studied by GC-MS. According to the total ion current chromatogram of the same retention time and the corresponding peak area, the GC-MS fingerprint of bioactivity was results showed that the substances extracted could promote the proliferation of stem cells. The fingerprint of bioactivity was used to evaluate the bioactivity of “ Si Wu Tang ”,and the accuracy rate reached %.ConclusionThis method is reliable to predict unknown Chinese medicine samples of stem cell activity. Key words : Plastrum testudinis ; Stem cell ; Proliferation ; GC-MS ; Fingerprint 龟版始载于《神农本草经》, 列为中品。正品龟版是动物乌龟的干燥腹甲, 龟版性微寒, 味微咸, 气微腥, 含胶质、钙盐、脂肪和角蛋白等, 具有补心肾, 滋阴降火, 潜阳退虚 3 热等功效[1]。近年来, 将龟版提取后, 找到了促进干细胞增殖的龟版有效部位(简称龟版浸膏) 。龟版浸膏能促进鼠 bMMSCs 的体外增殖[2], 促进大鼠骨髓损伤后及局灶性脑缺血后神经干细胞增殖[3~5], 增强 bMMSCs 移殖后分化为神经元[ 6] ;也可以在体外诱导成年大鼠 bMMSCs 分化为神经元样细胞[ 7] ,经过较长时间诱导后 bMMSCs 还可能向成骨方向分化[ 8] 。这提示龟版一方面可以促进 MSC s 增殖, 另一方面可能启动 MSC s 向神经方向和成骨方向分化。龟版的化学成分很复杂,通过对龟版的乙醇浸出物和水的浸出物进行游离氨基酸和水解后氨基酸及微量元素等化学成分分析,发现龟版含 17 种氨基酸及锌、铁等人体必需微量元素[9]; 孙苏亚等[ 10] 研究了从黄喉拟水龟龟版中分离出的 3 种甾类化合物: 胆甾醇、十二烯酸胆甾醇酯和甾醇-4- 烯-3- ***;他们还用 GC-MS 法研究了龟版中的脂肪酸类化合物[ 11] ;姜大成等[ 12 ]从龟甲滋阴活性方面入手, 用柱色谱和气相色谱分离并鉴定出具有滋阴活性的成分是十六烷酸胆甾醇酯和胆甾醇。龟版中什么化学组分起到调控干细胞增殖与