文档介绍：细胞生物学实验细胞实验复****一、细胞内蛋白质及核酸成分的测定 1. 细胞组织化学法在保持细胞结构的基础上, 利用某些化学试剂与细胞内的一些物质发生化学反应, 从而在细胞局部形成有色沉淀。再通过显微镜对细胞内的化学成分进行定位定性的检测方法。 2. 三***醋酸的作用:抽提 DNA 、 RNA ,使蛋白质与 DNA 、 RNA 分开 3. 固定:将细胞杀死,使其仍然保持原来的结构和形态 4. ***绿- 哌罗宁染色原理核酸是强性酸, ***绿- 哌罗宁是碱性染料, 具有亲和力。这两种碱性染料有选择地特异染色。***绿把 DNA 染成绿色,哌罗宁把 RNA 染成红色。二、观察细胞的生理活动 1. 淀粉肉汤:刺激腹腔聚集大量巨噬细胞,台酚蓝起标记巨噬细胞的作用 2. 渗透现象原理原生质层具有选择透过性, 原生质层内外的溶液存在着浓度差, 水分子就可以从溶液浓度低的一侧通过原生质层扩散到溶液浓度高的一侧。溶液渗透压的高低与溶液中溶质分子的物质的量的多少有关, 溶液中溶质分子物质的量越多,渗透压越高,反之则越低。 3. 质壁分离原理质壁分离是植物细胞失水造成的细胞壁与细胞质的分离。细胞壁主要由纤维素分子组成, 是水和溶质都可以通过的透性膜, 而细胞质膜是半透性膜, 有选择性和流动性。由于质膜对水的可透性, 水会从低溶质浓度一侧( 高水浓度) 向高溶质浓度一侧( 低水浓度) 运动, 即渗透作用。当植物细胞内的溶液浓度低于外界浓度时,细胞会失水,细胞壁形状不变,而细胞质膜皱缩,使得原生质体与细胞壁分离。 4. 血涂片方法①取末捎血一滴置于玻片的一端, 左手持载玻片, 右手以边缘平滑的推片的一端从血滴前方后移接触血滴, 血滴即沿推片散开。然后便推片与载片夹角保持 30-45 度平稳地向前移动,载片上保留下一薄层血膜。②使血膜迅速干燥, 以免血细胞皱缩. ③用蜡笔在血膜两侧划线, 以防染液溢出,然后将血膜平放在染色架上。加瑞氏染液 2-3 滴,使覆盖整个血膜,固定 -1min 。滴加等量或稍多蒸馏水, 与染料混匀染色 5-10min 。④用清水冲去染液, 待自然干燥后或用吸水纸吸干, 即可置血涂片于显微镜下进行镜检。三、同种细胞融合 1. 细胞融合:自然条件下或人工将两个或两个以上细胞合并成一个双核或多核细胞的过程。 的作用原理 PEG 具有强烈的吸水性以及凝聚和沉淀蛋白质的作用,高浓度聚乙二醇会破坏相互接触的细胞膜的磷脂双分子层, 改变细胞膜的结构和表面电荷特性。在不同种类的动物细胞混合液中加入聚乙二醇, 膜脂分子排列发生改变, 细胞发生凝集; 在稀释和除去聚乙二醇时, 质膜恢复原有的有序结构,在恢复过程中即可诱导相接触的细胞发生融合。 3. 融合率的计算公式:融合率= 融合细胞的全部核数/ 全部细胞核数× 100% 四、细胞组分的分级分离 1. 实验方法:匀浆、差速离心 2. 匀浆:在低温条件下,在等渗介质中,破碎细胞,制成各种细胞器和细胞内含物的混合液。 3. 差速离心:在均一介质中由低速到高速逐级离心,使被离心物按比重大小逐渐沉降下来。五、细胞的活体染色 1. 活体染色定义能使生活的细胞或组织特异性着色, 但对活样品又没有毒害作用的一种染色方法。其目的是显示生活细胞内的某些结构, 而不影响细胞的生命活动,也不产生任何物理、化学变化,不会引起细胞死亡。 2