文档介绍：1 炮制因素对甘草中有效成分甘草苷和甘草酸的影响【摘要】目的探讨炮制因素对甘草中甘草苷和甘草酸含量的影响。方法筛选适当提取方法,采用 HPLC-DA D 技术, Zorbax SB-C18 ODS 反向色谱柱( mm × 250 mm ,5 μ m) ,以 %( 体积分数) 甲酸溶液和甲醇为流动相,梯度洗脱, 流速 ml· min-1 , 柱温 30℃, 检测波长 250 nm 和 276 nm 。测定了同一产地、同一批次的甘草和炙甘草中甘草苷和甘草酸的含量。结果甘草经蜜炙后甘草苷和甘草酸的含量增加() 。结论炮制因素可显著增加甘草中甘草苷和甘草酸的含量。【关键词】甘草; 甘草苷; 甘草酸; 炮制; 高效液相色谱甘草系豆科植物甘草(Glycyrrhiza uraienxis Fisch) 的根及根状茎,俗称灵草、蜜甘、蜜草、国老、甜草等,性味甘平, 能调和诸药,始载于《神农本草经》,被列为上品,是临床上最常用的中药之一。甘草在中医临床应用中有甘草和炙甘草之分, 其中甘草指生甘草, 为原药材除去杂质, 洗净、润透 2 切片、生用入药者。炙甘草又名炙草、蜜炙甘草, 为生甘草片用蜂蜜拌匀,再炒至不粘手取出摊晾,然后入药者[1] 。炮制是根据中医药理论,依照辨证施治用药和药物自身性质以及调制、制剂的不同要求所采取的一项制药技术, 是中医药学的一大特色[2] 。在古代方剂中甘草与炙甘草应用区别明显: 甘草性甘偏凉, 长于泻火解毒、化痰止咳; 而甘草经蜜炙后味转甘温, 以补脾和胃、益气复脉力胜。现代药理学研究表明,炙甘草能抗多种心律失常; 甘草和炙甘草的调节免疫作用存在明显的差异, 蜜炙甘草的调节免疫作用显著强于甘草。炙甘草应为临床补气用甘草的最佳炮制品,可调节机体的免疫功能[3] 。由此可见, 甘草经炮制后理化性质发生变化, 其性味功能也有所改变。我们以甘草中最主要的 2 种有效成分甘草苷(liquiritin) 和甘草酸(glycyrrhizic acid) 为检测指标,采用 HPLC-DAD 法比较甘草炮制前后这 2 种成分含量的变化,从化学成分角度来探讨中药炮制的合理性、科学性。 1 仪器与试药 仪器 Shimadzu LC-10A 高效液相色谱仪( 日本岛津) ,包括 SCL-10Avp System Controller 、 SPD-M20A DA D 3 二极管阵列检测器、 LC-10 ADvp 泵、 FCV-10ALvp 四元低压梯度洗脱系统、 LC-Solution 色谱数据工作站; 梅特勒托利多 AE240 电子天平( 瑞士 Mettler Toledo 公司);Millipore 超纯水机; 超声波清洗器( 型号 SK250LH, 上海科导超声仪器有限公司)。甲醇( 色谱纯, 美国 公司); 水为超纯水; 其余试剂皆为分析纯。 试药对照品甘草苷( 批号: 06121824) 及甘草酸(批号: 06110101) 由上海同田生物科技有限公司提供。甘草(批号: 20071229; 产地:甘肃) 及炙甘草( 批号: 20071229; 产地: 甘肃) 药材购自徐州医药股份有限公司中药饮片厂, 经徐州医学院附属医院杜长俊副主任中药师鉴定为真品。甘草和炙甘草为豆科植物甘草的干燥根及根茎的炮制加工品。样品凭证保存于我科。 2 实验方法与结果 色谱条件色谱柱: Zorbax SB-C18 反向色谱柱( mm × 250 mm ,5μ m) ,流速 ml· min-1 ,柱温 30℃,检测波长分别为 250 nm 和 276 nm 。进样量: 20μl, 流动相:A为 %( 体积分数) 甲酸水溶液, B 为甲醇,用前超声脱气 30 min ,洗脱程序见表 1 。记录 65 min 色谱图,见图 1~3 。理 4 论塔板数按甘草苷和甘草酸峰计应不低于 4000 。表 1 梯度洗脱程序 对照品溶液的制备精密称取甘草苷对照品 mg 、甘草酸对照品 mg ,用 70% 甲醇水溶图 1 甘草提取液 250 nm 处 HPLC 图谱(1. 甘草苷;2. 甘草酸) 图2 炙甘草提取液 250 nm 处 HPLC 图谱(1. 甘草苷;2. 甘草酸)图3 对照品溶液 250 nm处 HPL C 图谱(1. 甘草苷;2. 甘草酸) 液溶解并定容于 5 ml 棕色容量瓶中,得甘草苷 g· L-1 及甘草酸 g· L-1的0 号混合对照品标准贮备溶液。从中精密量取适量,用流动相配成甘草苷浓度为 、 、 、 、 、 g· L-1 及甘草酸浓