文档介绍:关于体细胞胚胎发生
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图4-1 胚状体
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体细胞胚胎发生(somatic embryogenesis)
由单细胞(内源NH4+存在(每千克鲜重的组织约5 mmol)。如果内源NH4+达不到这个临界值,细胞就不能进行胚胎分化。而要使细胞内NH4+达到这个水平,不但需要有很少量的外源NH4+存在( mmol/L),还需要供应相对浓度很高的NO3-(60 mmol/L)。
虽然对于胚胎发生来说,其他形式的还原态氮都不如NH4+有效,但水解酪蛋白、谷氨酰***和丙氨酸等也可用做可靠的代替品。
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其他因子
钾的浓度:在野生胡萝卜中,高浓度的钾(20 mmol/L)是胚胎发生所必需的。
溶解氧的含量:培养基中溶解氧的含量应低于一个临界值( mg/L)。
活性炭:培养基中加入活性炭也能提高胡萝卜细胞胚胎发生的频率 。
某些挥发性和非挥发性物质:抑制愈伤组织中的体细胞胚胎发生。
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4. 体细胞胚胎发生的解剖学和细胞学
在胡萝卜悬浮培养中,对愈伤组织形成和生长的解剖学和组织学的研究表明,在培养中存在着两种类型的细胞:
①自由分散在培养基中的大而高度液泡化的细胞,一般不具胚胎发生潜力。
②成簇成团存在的体积小而细胞质致密的细胞,具成胚潜力。
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用脱落酸处理,体细胞胚可以发育成熟。
高水平生长素能抑制茎尖分生组织发育,当胚性细胞悬浮液转入缺乏生长素的培养基时,胚胎常能发育成熟。
与ABA结合,加入低水平的细胞分裂素(µmol/L)可能有利于低密度细胞培养的胚胎发生。
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体细胞胚胎发生可能重复发生,从成熟体细胞胚上又形成一些胚胎发生的新中心。
体细胞胚的萌发阶段受到体细胞胚高度不同步发育的不利影响。
各种物理因素也可能影响体细胞胚成熟,如温度、蔗糖浓度、光照等。
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体细胞胚在无植物生长调节剂的琼脂培养基上萌发。单胚萌发的培养基最好添加低水平的玉米素(/L)。
小植株形成大量叶片以后,应将其移栽到营养钵或蛭石中继续生长和发育。
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自学内容(p71~72)
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7. 胚性培养物形态发生潜能的丧失
遗传假说
培养细胞中细胞核物质变化,如多倍性、非整倍性和染色体结构突变,可能与长期培养物器官发生或胚胎发生潜能丧失有关。这种由遗传原因造成的形态发生潜力的丧失是不可逆的。
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生理假说
在某些情况下,形态发生潜力的下降可能是由于细胞或组织内激素平衡关系的改变造成的,或是由于细胞对外源生长调节物质敏感性的改变造成的。在这种情况下,细胞虽然停止了器官和胚胎的分化,但不一定就丧失了这种分化能力。因而,在这种情况下,如果改变外部处理条件,有可能够恢复细胞形态发生的潜能(器官和胚胎分化)。
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在复合多细胞外植体中,只有少数细胞能产生胚性细胞团,其余细胞没有细胞全能性。按照竞争假说,在有利于非胚性细胞生长的条件下,外植体中的非胚性细胞大量增殖,结果在不断反复继代培养的过程中导致胚性细胞逐渐消失。到了一定时期之后,培养物中已不再含有任何胚性细胞,这时若想再恢复它们的胚胎发生能力就不可能了。
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如果培养物中尚存少量胚性细胞,它们由于非胚性细胞的抑制作用,不能表达自身的细胞全能性,此时可以通过改变培养基成分,选择性地增殖具有胚发生全能性的细胞,有可能恢复培养物形态发生的潜能。
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8. 体细胞胚胎发生的实际应用
无性繁殖
由于胚性细胞生长和随后的体细胞胚发育可以在液体培养基中进行,所以将体细胞胚发生与工程技术结合,可以建立大规模的机械化或自动化培养体系。这种培养体系能循环生产大量的繁殖体(体细胞胚胎),且成本低廉。
通过重复体细胞胚胎发生形成体细胞胚无性系。
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人工(合成)种子的制备
植物人工种子(plant artificial seed)概念最早由Murashige(197