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正相柱反相柱的使用
特别注意HPLC使用事后的系统冲洗：含有缓冲盐溶液的流动相的冲洗方法：
1、先用100%的纯水冲刷，翻开排放阀，用3~5ml/min的流量，洗二十分钟左右后停泵。此举主假如针对吸液刷系统1h。
4、用同样的方法将甲醇改换为异丙醇、四氢呋喃，各冲系统1h。
5、最后将四氢呋喃改换为预先配制好的流动相冲系统1h，同时将柱塞杆冲洗系统内的10%异丙醇改换为流动相，保持50-60滴/min的速度冲洗柱塞杆。再将双通改换为正相色谱柱，待色谱柱平衡好此后便可剖析样品了。
请问正相色谱柱与反相色谱柱都有什么区别？
在使用过程中，各需要注意哪些方面？
此外，本人有一根正相的NH2柱，以前由于误用，使用甲醇和水作流动相，至今里面仍旧残留有甲醇和水，但我现在想用乙***和正己烷作流动相，请问怎样才能把柱子里面残留的甲醇冲洗掉？
高效液相色谱法中反相柱的清洁和重生
反相色谱是迄今在高效液相色谱中应用最宽泛的技术，主假如因为它合用于剖析极大多半的非极性物质和好多的可离子化的及离子化合物。大多半用于反相色谱的固定相都是天然的疏水物质，因此，剖析物是按照它们与固定相的疏水相互作用的大小来分其他，含有疏水的体制也能以同样的保存方式分别。
固定相上还有少数物质，如混淆相（比如苯基－己基）、尾端封闭和非尾端封闭种类和极性嵌入相－也存在于这些键合硅胶上。还有好多填料用于反相色谱，包括聚合物，聚合物表面涂上硅胶和氧化铝，无机－有机混淆物，涂层氧化锆，和石墨化碳。不同种类的固定相有他们自己的优点和缺点。
反相色谱柱利用各样流动相和增添物能够有好多的应用。一些技术利用增添物能够改变或修饰填料的表面。有时候这些增添物有可能会污染键合相表面。硅胶表面因为有着疏水键合相而有一些其他化学性质。残留的硅烷醇存在于所有的硅胶键合填料中。这些硅烷醇拥有弱酸性，因此能与某些待剖析物合基质成分，特别是碱性成分。，离子化能在中性pH条件下发生
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因此与阳离子产生静电相互作用就有可能发生。较老的A型硅胶能容纳高浓度金属离子（有时候100ppm或更多），而这能使硅胶表面的酸性更大甚至能发生金属鳌合现象或消除一些化合物。残留硅烷醇在非尾端封闭的硅胶合短链键合相如C2或C4上更让人烦忧。
使用者必须清楚他们所用的固定相表面特殊性质和可能的剖析物－固定相表面
的相互作用，这样当他们使用反相方法时才能考虑到可能的基质相互作用。比如，特别疏水的样品基质如玉米油，高芬芳物质，和蜡能粘住固定相装填表面并且改变他们的性质。含有蛋白质物质的生物流体也能吸附在装填表面。只管剖析者想尽最大努力来保护HPLC柱子，某些剖析物－基质污染能使固定相受到有害的影响。
当柱子被污染，它的色谱行为和没被污染的柱子会有些不同。被污染的柱子能产生反压问题。被污染的反相柱子必须冲洗和重生才能恢还原来的操作条件。这
部分的"柱子察看"将议论可行的方法使柱子答还原来的或差不多原来的状态。因为键合硅胶柱子是最受欢迎的，我重点叙述这种柱子。最后，我将议论其他反相柱子的清洁步骤。
什么致使反相柱子污染产生？往常，样品中含有一些对剖析者来说不感兴趣