文档介绍：农业部微生物肥料和食用菌菌种
质量监视检验测试中心
农用微生物菌剂生产技术规程 NY/T 883—2022
范围
本规程规定了农用微生物菌剂生产中所涉及的生产环境、生产车间、菌种、发酵增殖、后处理、包装、储运及质量检基补料流加的方法改善培育基的养分构成以到达高产。
灭菌
常用的灭菌方式及适用对象见附录C。
高压蒸汽灭菌操作要求
液体培育基、补料罐〔包括消泡剂〕、管道、发酵设备及空气过滤系统灭菌温度为 121℃~125℃(压力 ~ )，~。液体培育基装料量为 50%~75%发酵罐容积。
固体培育基物料灭菌温度为 121℃~130℃， ~；或承受 100℃灭菌 2h~4h，24h 后再灭菌一次。
在高温灭菌会产生对菌体生长有害物质或对易受高温破坏物料灭菌时，应承受物料分别灭菌或降低灭菌温度延长时间。
培育基灭菌后按进展检查。假设灭菌不彻底，培育基不得使用。
灭菌效果检查
承受显微镜染色观看法和/或发酵管试验法检查培育基的灭菌效果。
染色观看法
对待检测培育基无菌操作取样，在干净载玻片上涂片、染色、镜检。
假设镜检觉察有菌体，即可认为灭菌不彻底，需要进展
操作，无活菌体后培育基方可使用。
c) 假设未觉察菌体，初步认为灭菌彻底，培育基可以使用。在必要时,可进展操作，以进一步确认培育基灭菌彻底。
发酵管试验法
用无菌操作技术将 1mL 供试培育基加至 5mL 已灭菌的养分肉汤中，重复三次。置于37℃培育，24h 内无浑浊、镜检无菌体即可认为灭菌彻底。反之，即可判定培育基灭菌不彻底。
无菌空气
发酵生产中所通入的无菌空气承受过滤除菌设备制得，空气过滤系统应承受二级以上过滤。对制得的无菌空气按如下步骤检验合格前方可用于发酵生产。
用无菌操作技术，向装有 100mL～200mL 无菌肉汤培育基的三角瓶中通入待监测滤过空气 10min～15min。三角瓶置于 37℃培育，24h 内无浑浊、镜检无菌体即判定合格。
发酵把握
接种量的要求
—— 摇瓶种子转向种子发酵罐培育的接种量为 %～5%；
—— 在多级发酵生产阶段，对生长生殖快的菌种〔代时<3h〕，从一级转向下一级发酵的接种量为 5%~10%；对生长生殖较慢的菌种〔代时>6h〕，接种量不低于 10%。
培育温度
发酵温度应把握在 25℃~35℃，对特别类型的菌种应依据其特性而定。在发酵过程中，可依据菌体的生长代谢特性在不同的发酵阶段承受不同的温度。
供氧
通常承受的供氧方式是向培育基中连续补充无菌空气，并与搅拌相协作，或者承受气升式搅拌供氧。
对于好氧代谢的菌株或兼性厌氧类型菌株，培育基中的溶解氧不得低于临界氧浓度；严格厌氧类型菌株培育基的氧化复原电位不得高于其临界氧化复原电位。
物料含水量
固体发酵初期适宜发酵的物料含水量为 50%~60%。发酵完毕时，应把握在 20%~40%。
发酵终点推断
以下参数为发酵终点判定依据：
—— 镜检观看菌体的形态、密度,要求芽胞菌发酵完毕时芽胞形成率
≥80%；
—— 监测发酵液中复原糖、总糖、氨基氮、pH 值、溶解氧浓度、光密度及粘度等理化参数；
—— 监测发酵过程中摄氧率、CO 产生率、呼吸熵、氧传递系数等
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发酵代谢特征参数；
—— 固体发酵中物料的颜色、形态、气味、含水量等变化。
后处理
后处理过程可分为发酵物同载体〔或物料〕混合吸附和发酵物直接分装两种类型。
发酵物同载体(或物料)混合吸附对载体及物料的要求如下：
—— 载体的杂菌数≤×104 个/ g；
—— 细度、有毒有害元素〔Hg、Pb、Cd、Cr、 As〕含量、pH、粪大肠菌群数、蛔虫卵死亡率值到达产品质量标准要求；
—— 有利于菌体〔或芽胞、孢子〕的存活。
发酵培育物与吸附载体需混合均匀，可添加保护剂或实行适当措施，削减菌体的死亡率。吸附和混合环节应留意无菌把握,避开杂菌污染。
发酵物直接分装
对于发酵物直接分装的产品剂型，可依据产品要求进展包装。
建立生产档案
每批产品的生产、检验结果应存档记录，包括检验工程、检验结果、检验人、批准人、检验日期等信息。
产品质量跟踪
定期检查产品质量，并对产品建立应用档案，跟踪产品的应用状况。
附录 A
〔资料性附录〕
农用微生物制剂生产工艺流程示意图〔略〕
附录 B
〔资料性附录〕
农用微生物菌剂生产中菌种的常用保藏方式
保