文档介绍：重组蛋白在耻坂分枝杆菌中的亚细胞定位分析
分级分离实验 ⑴重组菌培养至对数期(OD6O=-)，加入终浓度为28mM的己内醍***，继续培养16h 诱导目的蛋白表达，10000rpm/min离心5min收集菌体，PBS洗涤菌体3次，重组蛋白在耻坂分枝杆菌中的亚细胞定位分析
分级分离实验 ⑴重组菌培养至对数期(OD6O=-)，加入终浓度为28mM的己内醍***，继续培养16h 诱导目的蛋白表达，10000rpm/min离心5min收集菌体，PBS洗涤菌体3次，最后用 8mLPBS重悬菌体
超声破碎细胞，4°C，3000g离心5min，收集上清(全细胞裂解液)
4r，27，000g(RCF)离心40min，获得细胞壁组分，上清转移至一新的超高速离心管内
4C，100，000g(RCF)离心2h，吸出上清(此为细胞质组分)，沉淀为细胞膜组分
Western blotting检测目的蛋白在细胞中各组分的情况
蛋白酶K降解分析
将经己内酰***诱导后的重组菌等分成三部分，PBS洗菌体3次，最后用5mL PBS重悬菌 体
分别在其中两个样品中加入蛋白酵K，终浓度为l00ug/mL，37C下分别孵育5min, l0min,加入蛋白抑制剂苯甲磺醍基***化物(PMSF)至终浓度为100 nM
样品在4C，8000g下离心5min, PBS洗样品，最终用200ul PBS重悬
⑷样品用Western blotting检测分析