1 / 8
文档名称:

磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒说明书.docx

格式:docx   大小:60KB   页数:8页
下载后只包含 1 个 DOCX 格式的文档,没有任何的图纸或源代码,查看文件列表

如果您已付费下载过本站文档,您可以点这里二次下载

分享

预览

磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒说明书.docx

上传人:zhangshus 2022/7/19 文件大小:60 KB

下载得到文件列表

磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒说明书.docx

文档介绍

文档介绍:磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒
MagBeads Plasmid DNA Mini Extraction Kit
【目 录号】PDE-5005、PDE-5010、PDE-5030、PDE-5100
【运输条件】2~25℃;
【保存条珠残夜,保持EP 管于磁力架上,整体颠倒两次使磁珠吸附完全,然后彻底吸弃上清液,期间避免接触磁珠。
.清洗
1)向EP管中加入500PL清洗液,从磁力架上取下,上下用力摇动3~5次(或使用移 液器吹打)使磁珠分散均匀,然后涡旋震荡1min,参考步骤6进行磁性分离。
2)使用500PL 80%乙醇,参照步骤7(1)操作2次。
注:该步骤DNA量过多时可能引起磁珠团聚,但不影响最终A得量及质量。
.除醇
保持EP管于磁力架上,置于55℃烘箱中干燥8min。
注:如没有烘箱,可将EP管置于通风橱通风或电风扇直接吹0min。
.洗脱
取出EP管,加入50PL洗脱液,用移液器吹打3min (或1000rpm涡旋振荡3min)使磁 珠与洗脱液充分混匀。
注:该步骤操作完毕后,将P管放入金属浴中继续温渐in,再次1000rpm涡旋振荡3min,可增 进一步提高洗脱效率,特别是针对分子量较大的质粒。
. 核酸转移
将EP管置于磁力架上静置20s至磁珠吸附完全,用移液器将洗脱液转移至另一干净 EP管中得DNA回收产物,抽提过程完毕,此时可弃去磁珠。
【手动高通量版操作步骤】
本试剂盒直接在48孔板中完成摇菌、收菌、重悬、裂解和复性步骤后,转入96孔板完 成后续抽提工作
.菌体收集
菌液提前在48孔板中培养过夜,将48孔板于4000rpm离心5 min,确保沉淀紧附于48 孔板底。小心直接倒扣弃去培养液,继续呈倒扣状置于干净吸水纸上吸尽残液。
.菌体悬浮
向48孔板样本孔中分别加入200PL菌体悬浮液,4000rpm涡旋震荡1〜2min将菌体沉淀 彻底悬浮。
.菌体裂解
向48孔板样本孔中分别加入200PL菌体裂解液,将48孔板于400〜500rpm温和涡旋震 荡1min使菌体裂解,裂解液应变为基本澄清,然后静置1min。
注:如果菌液量较大,可延长裂解时间至约而/力,但勿超遢m/力,否则质粒难以复性。
.质粒复性:
向48孔板样本孔中分别加入350PL质粒复性液(已提前4℃冷却充分)。将48孔板于 700rpm温和涡旋震荡1min使质粒复性(最佳状态为内容物呈蛋花状)。将48孔板4000rpm 离心15min,查看是否依然有悬浮物,若有则继续离心5min使孔道底部形成密实白色沉淀。
注:此步骤离心操作务必在板孔底部形成密实白色沉淀,否则应继续延长离心时间0团力。
.核酸结合
分别转移600PL质粒复性上清液至96孔板中,向样本孔中分别加入50PL吹打均匀的磁 珠悬浮液,将96孔板用封板膜封住,于1200rpm涡旋震荡5min,使磁珠均匀分散于溶液中。
.磁性分离
将96孔板置于专用磁力架上约20s至磁珠吸附完全。如板孔内壁有磁珠残夜,保持96 孔板于磁力架上,倾斜96孔板使上清液冲洗磁珠将磁珠吸附完全。然后小心直接倒扣弃去 上清液,继续呈倒扣状置于干净吸水纸上吸尽残液。
.清洗
1)向96孔板样本孔中分别加入500PL清洗液,1200rpm涡旋振荡1min,参考步骤6进 行