文档介绍：磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒说明书
磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒
MagBeads Plasmid DNA Mini Extraction Kit
【目录号】PDE-5005、PDE-5010、PDE-5030、PDE-5100 【运输条件】2~25℃;
【保存条件】组分①、③、④于2~8℃保存;组分⑦于-20℃保存;其它组分室温保存; 【试剂盒组成】
1. 使用前将RNase A溶液(组分⑦)全部加入菌体悬浮液(组分①)中,4℃保存备用; 2. 使用前检查菌体裂解液(组分②)是否出现浑浊,如有请置于37℃水浴中温浴至澄清; 3. 实验前质粒复性液(组分③)需提前置于4℃冷却充分;
4. 菌体裂解液(组分②)和质粒复性液(组分③)使用后应请立即盖紧盖子; 5. 磁珠悬浮液(组分④)严禁冻融和离心,以免磁珠受到损害,使用前务必充分混匀; 6. 所有离心步骤均为室温下进行,其中加入质粒复性液(组分③)后低温离心效果更佳; 7. RNase A溶液(组分⑦)长期不使用于-20℃保存,融化后4℃保存,并尽快使用; 8. 质粒DNA抽提得量与细菌的培养浓度、宿主菌、质粒拷贝数等因素有关; 9. 本操作指南经公司反复验证,使用前请仔细阅读并按指南建议操作。
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磁珠法·自动化:为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案
【产品简介】
本试剂盒可应用于对小量菌液进行质粒DNA抽提。试剂盒采用高性能纳米磁珠和特殊缓冲液系统。磁珠表面修饰有特殊化学基团,在一定条件下对质粒DNA具有极强的亲和力,当条件改变时可以可逆的释放质粒DNA,从而达到分离纯化质粒DNA的效果。整个操作过程简便、快速。本产品可最大限度的去除蛋白质等杂质,保证提取所得质粒DNA的纯度,所得质粒DNA产物可直接应用于酶切、测序、文库筛选、连接和转化等各种下游分子生物学实验。
本试剂盒可在EP管中进行手动法操作、在96孔圆孔板中实现手动法高通量操作(单人同时操作1~6块96孔板,可同步实现96~576份样本抽提工作)、或者与各种自动化核酸提取仪配合使用实现自动化高通量操作。
【试剂盒说明】
【自备仪器、耗材和试剂】
手动普通版
金属浴、涡旋混合仪、离心机、EP管、EP管用磁力架、80%乙醇。
手动高通量版
涡旋混合仪、吸水纸、烘箱或电风扇、水浴锅、96孔圆孔板()、96孔圆孔板专用磁力架、96孔板离心机、48孔尖底板(孔体积4mL)、48孔板用硅胶垫(或PCR板封板膜)、80%乙醇。
仪器自动版
英芮诚ETP-400核酸提取仪、涡旋混合仪、离心机、EP管、96孔圆孔板、80%乙醇。
【手动普通版操作步骤】
1. 菌体收集
将适量菌体(~)转移至EP管中,室温、12000rpm离心2min,吸弃上清液。
2. 菌体悬浮
向EP管中加入200μL菌体悬浮液,摇晃将菌体沉淀彻底悬浮。
3. 菌体裂解
向EP管中加入200μL菌体裂解液,上下轻柔颠倒EP管约2min使菌体充分裂解,裂解 2
磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒
液应变为基本澄清。
注:如果菌液量较大,可延长裂解时间至约4min,但不宜超过4min,否则质粒难以复性。
4. 质粒复性
向EP管中加入350μL质粒复性液(已4℃冷却充分),上下轻柔颠倒EP管使质粒复性(最佳状态为内容物呈蛋花状)。将EP管于4℃、12000rpm离心10min,将上清液转移到新的EP管中,并做好记录。
5. 核酸结合
向转入上清液的EP管中加入50μL吹打均匀的磁珠悬浮液,涡旋振荡5min,确保磁珠与溶液充分混匀。
6. 磁性分离
将EP管置于磁力架上静置约20s至磁珠吸附完全。如EP管内盖有磁珠残夜,保持
EP管于磁力架上,整体颠倒两次使磁珠吸附完全,然后彻底吸弃上清液,期间避免接触磁珠。
7. 清洗
1)向EP管中加入500μL清洗液,从磁力架上取下,上下用力摇动3~5次(或使用移液器吹打)使磁珠分散均匀,然后涡旋震荡1min,参考步骤6进行磁性分离。
2)使用500μL 80%乙醇,参照步骤7(1)操作2次。
注:该步骤DNA量过多时可能引起磁珠团聚,但不影响最终DNA得量及质量。
8. 除醇
保持EP管于磁力架上,置于55℃烘箱中干燥8min。
注:如没有烘箱,可将EP管置于通风橱通风或电风扇直接吹10min。
9. 洗脱
取出EP管,加入50μL洗脱液,用移液器吹打3min(或1000rpm涡旋振荡3min)使磁珠与洗脱液充分混匀。
注:该步骤操作完毕后,将EP管放入金属浴中继续温浴5min,再次1000rpm涡旋振荡3min,可增