文档介绍：实验二:质粒DNA的提取
一、实验目的与背景
掌握碱裂解法提取质粒的原理
学习和掌握碱裂解法提取质粒的技术
载体:基因工程中,携带目的基因进入宿主细胞进行扩增和表达的工具。
载体按其行使的功能分为克隆载体和表达载体,按组成元件的来源不同分为质粒载体、噬菌体载体、病毒载体等。
质粒(pBR322、pUC)
噬菌体
M13噬菌体
噬菌粒
pET
载体
载体类型
克隆外源 DNA 片段大小
主要用途
质粒载体 λ噬菌体载体 柯斯质粒载体 M 13 载体
<15kb <23kb <45kb 300-400bp
克隆和表达外源基因;DNA 测序 构建基因文库和 cDNA 文库 构建基因文库 制备单链 DNA; 定位诱变; 噬菌体展示
①复制子
②有一个或多个利于检测的遗传表型
③有一到几个限制性内切酶的单一识别位点
④适当的拷贝数
基因工程用的载体需具备的条件
质粒是基因工程中常用的载体之一,是染色体外小型双链环状DNA,大小在1~200kb之间,存在于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中,在细菌细胞中最多。
质粒
质粒能自主复制,在细菌中不断复制自身。在细胞内的复制分成两种类型:一种是低拷贝数的质粒,每个细胞仅含有一个或几个质粒分子,这种类型称为“严谨型”复制的质粒;另一种是高拷贝数的质粒,拷贝数一般在20个以上,这种类型称为“松弛型”复制的质粒
质粒能编码一些遗传性状,如抗药性(如抗氨苄青霉素、抗四环素等),耐受重金属,产生细菌素等,被质粒转化的细菌也获得了这些额外的特性