文档介绍：神经细胞体外培养方法及应用
田东萍
汕大医学院病理教研室
神经细胞体外培养的历史
神经组织的体外培养方法是由Harrison,于1907年首创的。
由于该方法具有简化细胞生化环境、明确生长条件、便于施加实验因素及容易获得活体直接观测结果等优点,因而已成为研究神经系统结构和功能的有效手段。
九十余年来,这项技术已从组织块(或植块)培养(explant culture)发展到分离细胞培养(dissociated cell culture),并逐渐与多种现代技术结合起来,在神经科学各领域发挥了重大作用。
组织块培养→分离细胞培养→甚至单一型细胞培养
神经组织的植块培养法
悬滴培养方法
单盖玻方法
双盖玻方法 1925
改良双盖玻方法
培养物:
CNS灰质、白质、外周神经节或神经小段
↓↓
突起非神经元外伸
优点
所需培养液量少,可反应组织代谢中
微量生化改变
保留了植块内组织特征
不足
培养空间小,O2 CO2供少
培养空间湿度难以控制,水分会蒸发
密封手续繁杂,不利更换培养液,难
以观察单个神经元生长。
神经元的分离细胞培养方法
1956年,Nakai首创了神经组织的分离培养方法
材料来源:胚胎动物神经组织
神经元增殖发生于胚胎期
形态学分化和化学分化程度低,体外存活强,成熟后则相反,且神经元会受到大的普遍损伤。
部位:灰质、PNS神经节,神经元集中,密度大
神经元的体外培养液
天然合成成分血清血浆胚胎撮液
人工培养基
无血清培养基化学限定性培养基
常用的:DMEM + 添加剂
F12
①葡萄糖为神经元能量代谢主要来源 33mm
②CO2 NaHCO3缓冲系统重要 HEPESO2耗量更高
③K+ 神经元生理活动的重要离子,K+是神经元存活所必需的,K+ 能提高神经元存活,促分化
④非神经元成分的抑制有 2-3天
神经元无血清限定培养液
人工合成的培养基虽然具备了细胞生长的基本营养物质和无机盐类,但仍无法满足不同类型细胞的特殊需要。大多数神经元在基础培养液中即使能够存活也为期不长,更难以分裂。因此可根据神经元的特性,给基础培养中再添加某些特殊物质。