文档介绍：关于紫外可见分光光度法 (5)
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第1页，讲稿共56张，创作于星期二
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§1-1 吸光光度法基本原理
一、吸光光度法的概念
在光谱分析中，依据物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法称为吸光光度法。
主
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ε与a的关系为：
ε = Ma （ M为物质的摩尔质量）
摩尔吸光系数ε(L·mol-1·cm-1)在数值上等于浓度为1mol·L-1 、液层厚度为1cm时该溶液在某一波长下的吸光度。
吸光系数a(L·g-1·cm-1)相当于浓度为1g·L-1 ，液层厚度为1cm时该溶液在某一波长下的吸光度。
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吸光度A 描述溶液对光的吸收程度：
A＝lg（I0/I)
透过度T 描述入射光透过溶液的程度:
T = It/I0
吸光度A 与透光度T 的关系:
A ＝ －lg T
A、T、c 三者的关系如右图所示。
吸光度A具有加和性： A总= A1+ A2
A1、A2分别为两种吸光物质的吸光度。
A
T
A
T
C
图8-3 A，T，C关系曲线
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朗伯-比耳定律的物理意义：当平行单色光通过单一均匀的、非散射的吸光物质溶液时,溶液的吸光度与溶液浓度和液层厚度的乘积成正比。
朗伯-比耳定律是吸光光度法的理论基础和定量测定的依据。广泛地应用于紫外光、可见光、红外光区的吸收测量，也适用于原子吸收测量。
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（1）吸收物质在一定波长和溶剂条件下的特征常数；
（2）不随浓度c和光程长度b的改变而改变。在温度和波长等条件一定时，ε仅与吸收物质本身的性质有关，与待测物浓度无关；
（3）可作为定性鉴定的参数；
（4）同一吸收物质在不同波长下的ε值是不同的。在最大吸收波长λmax处的摩尔吸光系数，常以εmax表示。εmax表明了该吸收物质最大限度的吸光能力，也反映了光度法测定该物质可能达到的最大灵敏度。
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（5） εmax越大表明该物质的吸光能力越强，用光度法测定该物质的灵敏度越高。
ε>105：超高灵敏；
ε=(6～10）×104 ：高灵敏；
ε=(2～6）×104 ：中等灵敏；
ε<2×104：不灵敏。
（6）ε在数值上等于浓度为1mol/L、液层厚度为1cm时该溶液在某一波长下的吸光度。
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—比耳定律的原因
标准曲线法测定未知溶液的浓度时，发现：标准曲线常发生弯曲（尤其当溶液浓度较高时），这种现象称为对朗伯—比耳定律的偏离。
引起这种偏离的因素（两大类）：
（1）物理性因素，即仪器的非理想引起的；
（2）化学性因素。
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（1）物理性因素
难以获得真正的纯单色光。
朗伯—比耳定律的前提条件之一是入射光为单色光。
分光光度计只能获得近乎单色的狭窄光带。复合光可导致对朗伯—比耳定律的正或负偏离。
非单色光、杂散光、非平行入射光都会引起对朗伯—比耳定律的偏离，最主要的是非单色光作为入射光引起的偏离。
图8-4-1 工作曲线
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｜Δε｜很小时，则可近似认为是单色光。为
克服非单色光引起的偏离，首先应选择比较好
的单色器。此外还应将入射光波长选定在待测
物质的最大吸收波长且吸收曲线较平坦处。
(2)化学性因素
朗伯-比耳定律假定：所有的吸光质点之间不发生相互作用，实验证明，这种假定只有在稀溶液时才基本符合。
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当溶液浓度c >10-2mol·L-1时，吸光质点间可能发生缔合等相互作用，直接影响了对光的吸收。朗伯-比耳定律只适用于稀溶液。
溶液中存在着离解、聚合、互变异构、配合物的形成等化学平衡时，使吸光质点的浓度发生变化，影响吸光度。
(3)工作曲线不过原点
存在系统误差：吸
收池不完全一样；参比
溶液选择不当等。
图8-4-2 工作曲线
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§1-2 紫外可见分光光度计
一、主要部件
光源
单色器
样品室
检测器
显示
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1．光源：
2．单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件
棱镜——对不同波长的光折射率不同
色散元件