文档介绍：关于酶联免疫吸附试验检测伤寒O抗体
第1页，讲稿共21张，创作于星期三
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摘要
目的：检测伤寒O抗体一般采用肥达实验（直接凝集实验），在临床诊断中有重要的意义。能否建立一个用酶联免疫吸附法检测血清中抗
1份血清（5ml）+ 1份生理盐水 + 2份饱和硫酸铵
置试管中 2000转离心20min
弃上清
~2ml NS 溶解沉淀
透析24h
收集、标记、冰冻 5管
缓缓摇动 ,室温2h（）
盐析法
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酶与抗体的连接
实验原理：NaIO4是强氧化剂，能将HRP的甘露糖部分（与酶活性无关的部分）的羟基氧化成醛基，然后与抗体的氨基结合，形成酶标抗体，反应式如下：
实验方法：
标记过程：
ml HAC-NaAc 缓冲液中（老师做）。
,此时酶的颜色由黄变绿。4℃作用30min。
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酶与抗体的连接
%（稳定剂）终止反应，室温30min 。
~, ，4℃过夜。
，4℃2小时。
PBS液透析过夜，收集、标记成酶标记抗体和冻存
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酶联免疫竞争法检测伤寒O抗体
（一）.酶联免疫竞争法检测伤寒O抗体预实验
：抗原（伤寒）用包被液稀释，每孔加入100μl，置37℃作用4h或4℃作用24h。
：弃去孔中液体，洗涤液洗涤3次，每次1min，于吸水纸上充分拍干。
：每孔加入酶标Ab及Ab各100μl，放入37℃恒温箱中孵育30min。（如图1）
：同上
：每孔加入底物液A1滴、B1滴，避光放置约5-15min，密切观察。
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酶联免疫竞争法检测伤寒O抗体
待测
酶标
原液
1：5
1：25
1：125
阴性
对照
1：25
1：50
1：100
1：200
（图1）
选择每一排阴阳色差最明显者为最佳工作浓度
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酶联免疫竞争法检测伤寒O抗体
稀释方法：
1:25——1200ul(牛奶）+50ul（酶标）=1250ul
1:50——600ul(牛奶）+600=1200ul
1:100—— 600ul(牛奶）+600=1200ul
1:200——600ul(牛奶）+600=1200ul
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酶联免疫竞争法检测伤寒O抗体
1:5——600ul(牛奶)+150ul(待测)=750ul
1:25——600ul(牛奶)+150ul=750ul
1:125——600ul(牛奶)+150ul=750ul
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酶联免疫竞争法检测伤寒O抗体
（二）酶联免疫竞争法检测伤寒O抗体正式实验
选取预实验所选定的最佳工作浓度对酶标抗体及待测抗体进行稀释，验证该检测方法的可行性。方法如下：
(如图2)
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酶联免疫竞争法检测伤寒O抗体
自己的待测Ab100ul+酶标Ab100ul
别组的待测Ab100ul+酶标Ab100ul
稀释液100ul+酶标Ab100ul
阳性
对照
待测1
待测2
待测3
待测4
阴性
对照
图(2)
经洗涤显色后,根据颜色深浅判断检出率,若待测组颜色更接近于阳性对照,则记为“+”，反之则记为“-”。
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结果讨论
（一）实