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核酸提取原理及方法.ppt

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核酸提取原理及方法.ppt

文档介绍

文档介绍:核酸提取原理及方法
前言
   核酸是遗传信息的载体,是最重要的生物信息分子,是分子生物学研究的主要对象,因此,核酸的提取是分子生物学实验技术中最重要、最基本的操作 。
主要内容
核酸简介
基因组DNA提取
核酸提取原理及方法
前言
   核酸是遗传信息的载体,是最重要的生物信息分子,是分子生物学研究的主要对象,因此,核酸的提取是分子生物学实验技术中最重要、最基本的操作 。
主要内容
核酸简介
基因组DNA提取
质粒DNA提取
真核细胞总RNA提取
琼脂糖凝胶电泳
核酸简介
核酸是由核苷酸或脱氧核苷酸通过3′,5′- 磷酸二酯键连接而成的一类生物大分子。包括核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)两类。
DNA主要储存遗传信息。
RNA主要传递遗传信息。
核酸简介

核酸简介——质粒DNA
质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200 kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。
质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌等细胞中,它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息。
核酸简介
基因组DNA提取
质粒DNA提取
真核细胞总RNA提取
基因组DNA提取方法
基因组DNA提取的几种常用方法:
CTAB法
SDS法
其他方法
基因组DNA提取——CTAB法
CTAB法原理(植物DNA提取经典方法)
CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,可溶解细胞膜,并与核酸形成复合物。
该复合物在高盐溶液中(> mol/L NaCl)是可溶的,通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
基因组DNA提取——CTAB法
 CTAB提取缓冲液的经典配方
Tris-HCl (pH )提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏;
EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性;
NaCl 提供一个高盐环境,使DNP充分溶解,存在于液相中;
CTAB溶解细胞膜,并结合核酸,使核酸便于分离;
β-巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除。

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