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基因扩增PCR实验室
基因扩增（PCR）实验室
辽阳鑫宇实验室设备安装工程有限公司技术部
前 言
基因扩增检-20℃（或-80℃）冰箱，生物安全柜、高速制冷离心机（台式）、混匀器、恒温水浴箱或加热模块、制冰器或制冷模块、微量加样器、消耗品（一次性手套、耐高压处理的离心管和加样吸头）、专用工作服工作鞋（套）、上下水设备、专用办公用品和废弃物容器、紫外线杀菌灯。如需处理大分子的DNA 应具有超声波水浴仪。
扩增区
核酸扩增仪、微量加样器、消耗品（一次性手套、耐高压处理的离心管和加样吸头）、专用工作服工作鞋（套）、专用办公用品和废弃物容器、紫外线杀菌灯。
扩增产物分析区
视检验方法不同而定，基本配置如下：电泳仪、电泳槽、摄影/像设备、变性高效液相分析仪、测序仪、紫外透射仪、普通冰箱、离心机、恒温水浴、微波炉、上下水设备、紫外线灯、微量加样器、消耗品（一次性手套、耐高压处理的离心管和加样吸头）、专用工作服工作鞋（套）、专用办公用品和废弃物容器。
各区域设备和仪器的配备，应根据使用的扩增检测技术或试剂特点，对设备和仪器进行必要的增减。
PCR实验室单向流流向制度
实验室的空气单向流流向应该为：试剂储存和准备区→样品制备区→扩增区→扩增产物分析区，不得逆向流动。扩增前区保持微（弱）正压状态，扩增后区保持微（弱）负压状态。
实验用品单向流工作流向应该为：试剂储存和准备区→样品制备区→扩增区→扩增产物分析区，不得逆向进行。实验用品包括实验材料（试剂、样品和扩增产物）、实验器材（容器、板架、实验服装、帽子、口罩、手套、鞋套）、办公用品（记录纸、笔）、以及清洁工具等。物品的传送是通过互锁式传递窗传递。
实验人员单向工作流流向应该为：进入各工作区域严格按照试剂储存和准备区→样品制备区→扩增区→扩增产物分析区单一方向进行，不得逆向走动。原则上实验人员应在扩增后区工作后当天不得再返回扩增前区工作。在标本制备区由于加样的操作中可能会发生气溶胶污染，所以应避免或减少在本区内不必要的走动。
实验室的单向清洁流流向应当为：试剂储存和准备区→样品制备区→扩增区→扩增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应当有各自的清洁用具，以防止交叉污染。
PCR实验室工作基本原则和实验室各区域工作注意事项
严格的实验室分区制度；各区域必须有明确的标记，只用于特定的操作，不得从事其他工作；不同区域的设备物品（仪器、设备、材料、清洁工具），不得交叉使用。
不同工作区域使用不同工作服（例如不同颜色），工作人员离开工作区域时，不得将工作服带出。
实验前移入所需试剂、耗材、样品以及盛放污染物的容器。
试剂储存和准备区：储存试剂和用于标本制备的消耗品等材料须直接运送至本区，不能经过扩增检测区。试剂盒中的阳性对照品及质控品不能保存在本区，应当保存在标本制备区。
标本制备区：由于在样品混合、核酸纯化过程中可能会发生气溶胶所致污染，可通过在本区内设正压条件，避免从邻近区域进入本区的气溶胶污染。为避免标本间的交叉污染，加入待测核酸后，必须盖好含反应混合液的反应管。对具有潜在传染危险性的材料，必须在生物安全柜内操做，并有明确的标本处理和灭活程序。
扩增区：为避免气溶胶所致的污染，应当尽量避免或减少本区内的人员不必要的走动。必须注意所有经过检测的反应管不得在本区内打开。
扩增产物分析区：核酸扩增后产物的分析方法较多，如膜上或微孔板或芯片上探针杂交方法（放射性核素标记或非放射性核素标记）直接或酶切后琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰***凝胶电泳southern转移、核酸测序方法、质谱分析等。本区是最主要的扩增产物污染来源，因此，必须注意避免通过本区物品及工作服将扩增物带出。在使用PCR-ELISA方法检测扩增产物时，必须使用洗板机洗板，废液必须收集在1moL /L HCL中，不能在实验室内倾倒，应当远离PCR实验室的地方弃掉。用过的吸头也必须放在1moL/L HCL中侵泡后再放到废弃物容器或垃圾袋中按程序处理。
工作结束过后，须对工作区进行清洁处理：对工作区域的实验台面进行清洁消毒（如使用次***酸钠），实验台面采用紫外线照射更为方便、效果更佳。由于紫外线照射的距离和能量对于去污的效果非常关键，可使用移动紫外线灯（254nm波长），在工作完成后调至实验台面上60-90cm范围内照射。由于扩增产物仅几百和几十碱基对(bp),对紫外线损伤不敏感