文档介绍：分子荧光分光光度法实验技术
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分子发光分析法
分子发光分析包括:
荧光分析（fluorescence analysis）
磷关系。
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3）物质的分子结构和荧光的关系
了解荧光和物质分子结构的关系，可以帮助我们考虑如何将非荧光物质转化为荧光物质或将荧光强度不大或选择性不高的物质转化为荧光强度大及选择性高的荧光物质，以提高分析的效果。
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3）物质的分子结构和荧光的关系
物质的分子结构与荧光的发生及荧光强度的大小紧密相关。
分子产生荧光必须具备2个条件：
（1）物质分子必须具有能吸收一定频率紫外光的特定结构
（2）物质分子吸收了特征频率的辐射能之后，必须具有较高的荧光效率。荧光效率大，在相同的浓度下，荧光的发射强度也大。
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3）物质的分子结构和荧光的关系
1、具有共轭双键体系的分子。共轭程度越大，分子的荧光效率越大。
2、具有刚性平面结构的分子。刚性的不饱和的平面结构具有较高的荧光效率，分子刚性及共平面性越大，荧光效率越高。
3、苯环上取代基的类型。给电子基团常使荧光增强，吸电子基团及卤素会减弱甚至破坏荧光。
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4）环境对荧光的影响
分子所处的环境，如温度、溶剂、PH值等都会影响分子结构和立体构像，从而影响荧光强度。
（1）温度：一般说来，大多数荧光物质的溶液随着温度的降低，荧光效率和荧光强度将增加；相反，温度升高荧光效率将下降。
（2）溶剂：同一种荧光物质溶于不同的溶剂，其荧光光谱的位置和强度可能有明显的不同。一般情况下，随着溶剂的极性增加，荧光强度将增强。
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4）环境对荧光的影响
（ 3）溶剂PH值的影响，当荧光物质是弱酸或弱碱时，溶剂PH值对荧光强度有较大影响。
（4）猝灭剂的影响，荧光猝灭是指荧光物质与溶剂子或其他溶质分子相互作用，引起荧光强度降低、消失或荧光强度与浓度不呈线性的关系的现象。引起荧光猝灭的物质称为猝灭剂（quencher）。常见的猝灭剂有卤素离子、重金属离子、氧分子、以及硝基化合物、重氮化合物、羰基化合物等。
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五、荧光分光光度计的结构
发光源：采用高压氙灯。
试样池：荧光分析用的试样池需用低荧光材料，常用石英池，形状为四面透光的方形。
检测器：荧光的强度比较弱，因此要求检测器有较高的灵敏度，常用光电倍增管。
单色器：采用光栅作为单色器。
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六、荧光的定量分析
1、荧光测定的线性范围一般在10-5~100μg/ml。当浓度较高时，吸光度（A）〉，由于自猝灭和自吸收等原因，荧光强度与浓度不呈线性关系，荧光强度同浓度的线性关系将向浓度轴偏离，发生负偏差。
2、与紫外-可见分光光度法相同，也可采用标准曲线法和标准对照法。
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六、荧光的定量分析
3、测量条件的选择
选择线性范围：当荧光物质溶液的吸光度A≤，荧光强度与浓度才呈线性关系。
选择合适的激发光和荧光波长：一般选择激发光谱中能产生最强荧光的入射光波长作为激发光，荧光光谱选择最强荧光的波长作为荧光测定的波长。
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七、荧光分光度计的性能
可检测荧光、磷光及生物发光
扫描速度快，可达24000 nm/分，数据采集速率达80次/秒
波长范围：190-1100 nm
光谱带宽：、、5、10和20 nm五档切换
具有液体池和固体池，并具有自动控温设备。
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八、荧光分光度计的使用
1、开启计算机，键入用户名和密码，打开分光光度计主机，运行Cary Eclipse软件。
2、按样品的测定要求进入相应的测定模块。
3、设定测定参数，按操作流程测试样品，测定结果保存或打印。
4、测试完毕后，在系统指定的出口退出系统；先关闭分光光度计主机电源，再关闭电脑，切断总电源。
5、罩上仪器罩，打扫