文档介绍：体外放射分析技术
分析原理
*Ag + Ab
Ag
+
*Ag-Ab + *Ag
Ag-Ab + Ag
条件：
*Ag与Ag免疫活性相同
*Ag与Ab恒量
*Ag与Ag总量大于Ab有效结合位点
A作的实验误差 布，以精密度评价
试剂配制等
(Systematic Error)： 通过努力可以
消除
由某一固定因素引起，仪器、试剂、
操作程序、试验方法等
主要优点：
生物制剂，稳定性受多种因素影响，需有质量控
制措施（Quality Control)
灵敏度高：可达10-9―10-12 g(mol)
特异性强：抗原抗体结合具有很高的特异性
应用范围广：凡能制备相应抗体的生物活性物质，
只要含量不低于RIA探测极限，都可建立
操作简便：所需试剂少，测量及数据处理易于实
现自动化
主要缺点：
灵敏度很难超过10-15***平
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非竞争性放射免疫分析 (免疫放射分析 IRMA)
：
放射核素标记在抗体上，与待测抗原结合后，用一定手段将多余抗体除去，测定复合物的放射性，其活度与待测抗原呈正相关
Ag + *Ab Ag.*Ab + *Ab
(过量） (B) (F)
IRMA与RIA的主要区别：
RIA IRMA
1. 竞争性结合分析 非竞争性结合分析
2. 三种主要反应试剂 两种主要反应试剂
3. 标记抗原 标记抗体
4. 复合物放射活度与 复合物放射活度与
待测抗原呈负相关 待测抗原呈正相关
5. NSB主要影响高剂 NSB主要影响低剂
量反应 量反应
IRMA主要优点：
温育时间短： 37℃温育23小时即可
灵敏度高： 是RIA的10 100倍
测量范围宽：标准曲线工作范围宽,RIA 为2个
数量级，IRMA可达3个数量级
特异性强： 应用针对某一抗原决定簇的单抗,不
易发生交叉反应
IRMA主要缺点：
需要二种McAb
抗体用量大
非放射标记的免疫分析法
化学发光分析
时间分辨荧光分析
酶免疫分析
电化学发光（ECL）： ECL是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫之后的新一代标记免疫测定技术 ECL是一种在电极表面由电化学引发的化学反应，实际上包括了电、化学发光两个过程，故是化学发光的一种发展，电化学反应在电极表面周而复始的进行，光信号明显增强，因而ECL与CL的差异在于：
ECL是电启动发光反应，CL是通过化合物简单的混合启动的发光反应。 ECL反应更易精确控制，更具灵活性。
ECL反应原理：
化学发光反应导致光的发射是来自钌（Ru）化合物的电的
激发，而不是化学的激发。
（time-resolved fluorescence immunossay
—TRFIA）
稀土族中的镧系元素（Eu、Tb、Sm、Dy等）以离子价态时，受到紫外光或激光等激发后，会以荧光的形式发射光谱，其激发光光谱的波长和发射荧光的强度因离子不同而有差异，而且具有相当长的衰减时间，这样就为时间分辨荧光 (TRF)所发射的信号采集和多标记的应用提供了条件。
TRFIA是一种以镧系元素螯合物标记抗体或抗原，利用时间分辨荧光光度计测量法排除检品中非特异性荧光干扰的测量技术。
铕： （Eu—europium）
铽： （Tb—terbium）
钐： （Sm—samarium）
镝： （