文档介绍：第十三章免疫细胞及细胞因子的检测
免疫缺陷症
自身免疫病
肿瘤
淋巴细胞或淋巴细胞亚群的数量和功能的变化
机体细胞免疫水平
第一节免疫细胞的分离与纯化
外周血的淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、红细胞和血小板，m的羰基铁颗粒。
（二）、淋巴细胞亚群的分离
1、E花环沉降法：基本原理是利用T细胞有羊红细胞受体（E受体），可以与羊红细胞结合形成较大的E花环的特性，可将T细胞和B细胞分离。
2、尼龙毛柱分离法：利用B细胞和单核细胞具有易粘附于尼龙纤维表面的特性，将T细胞和B细胞分离。
3、亲和板结合分离法：利用亲和层析和抗体固相包被原理。
第二节淋巴细胞数量的检测
一、T淋巴细胞数量的检测
（一）、免疫荧光法：直接法、间接法
（二）、酶免疫组织化学法：以酶作为抗体标记物→细胞酶免疫组化
生物素——链霉亲和素放大系统提高灵敏度
（三）、花环技术
1、E花环试验
2、抗体致敏花环法
用相应的抗CD3单克隆抗体吸附于醛化的红细胞（致敏）+受检细胞→抗原抗体反应→受检细胞周围粘附3个或3个以上红细胞为花环形成细胞，计算花环形成细胞与计数淋巴细胞之比。（见图）
E花环试验结果示意图
二、B淋巴细胞数量的检测
（一）、CD抗原的检测
（二）、SmIg的检测：鉴定B细胞可靠的指标。
第三节淋巴细胞功能的检测
淋巴细胞功能测定是在免疫缺陷病及多种疾病的发病机制、疗效判断、免疫治疗及预后的重要依据。可分为体内实验和体外实验。
一、T淋巴细胞功能的检测
1、淋巴细胞转化实验
刺激物
基本原理：T细胞敏感刺激物在体外刺激T细胞→T细胞增殖、转化→根据其增殖转化能力评定相应的细胞功能。
非特异性
特异性
①形态法
外周血或单个核细胞+刺激物————→涂片染色镜检
参考值：60%~80%，小于50%视为降低。
评价：方法简便易行，受主观因素影响大。
37℃培养
72小时
②放射性核素法
外周血或单个核细胞+刺激物加适量3H-TdR 记录每分钟脉冲数（cpm）
SI=PHA刺激管cpm均值/空白对照管cpm均值。
评价：结果客观，但价格昂贵，有放射性核素污染。
37℃培养
56小时
培养16小时
③MTT比色法
外周血或单个核细胞+刺激物————→加适量MTT混匀————→比色法测OD值。
评价：方法敏感、简单、快速、无污染。
37℃培养
70小时
培养4~6小时
二、B淋巴细胞功能的检测
临床常检测各类抗体 B细胞的功能．
对于免疫缺陷患者或科研实验时：
①反向溶血空斑试验：检测人类Ig分泌细胞.　淋巴细胞+SPA-SRBC+抗人Ig抗体+补体溶血空斑。
②酶联免疫斑点试验：检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量。
抗原包被固相载体→淋巴细胞→酶标二抗→ 底物显色。
评定
37℃
3~5小时
第四节吞噬细胞功能的检测
吞噬细胞
单核一巨噬细胞系统：
①非特异性地吞噬；
②特异性免疫过程起作用。
中性粒细胞：以吞噬功能为主，发挥非特异性免疫防疫作用并参与机体的免疫应答炎症损伤等。
吞噬活动：趋化、吞噬、胞内杀灭作用三个阶段。
一、中性粒细胞功能的检测
（一）、中性粒细胞趋化功能的测定
琼脂糖凝胶平板法
（二）、中性粒细胞吞噬功能测定
待检细胞悬液+白色念珠菌悬液美蓝染色→涂片镜检
吞噬率61%-64%，对大肠杆菌杀菌率>90%，对金葡菌杀菌率>85%
保温
二、巨噬细胞功能检测
基本原理：人巨噬细胞与鸡红细胞（CRBC）混合后孵育，通过计算巨噬细胞吞噬CRBC百分率和吞噬指数判断人巨噬细胞的吞噬功能。
参考值：吞噬率61%~64%；吞噬指数接近于1。
第五节、细胞因子的检测
细胞因子：是由活化的免疫细胞及某些基质细胞表达并分泌的活性物质，其生物学功能是介导和调节免疫应答及炎症反应，其化学本质是蛋白质或多肽。
测定方法：分子生物学测定方法，免疫测定方法、生物学测定方法。
种类：白细胞介素、集落刺激因子、干扰素、肿瘤坏死因子、生长因子、趋化因子。表现为细胞因子网络。
1、免疫学检测定法
细胞因子的化学本质是蛋白或多肽，因而很容易制备得到相应的抗细胞因子的特异单克隆和（或）多克隆抗体，从而建立相应细胞因子的高特异性的免疫测定方法。
主要方法：
1、ELISA：用于可溶性细胞因子测定；
2、流式细胞分析法
3、酶联免疫斑点试验
细胞内细胞因子的免