文档介绍：第十三章免疫细胞及细胞因子的检测
免疫缺陷症
自身免疫病
肿瘤
淋巴细胞或淋巴细胞亚群的数量和功能的变化
机体细胞免疫水平
第一节免疫细胞的分离与纯化
外周血的淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、红细胞和血小板,可根据它们的理化特性,如细胞大小、密度、表面电荷和粘附能力等存在差异,分离不同的细胞群体。但淋巴细胞理化特性与其它细胞差异甚微,不容易分纯,所以产生了专门的淋巴细胞分离纯化技术,旨在于获得高纯度、高收率和高活性的不同类型和不同亚群特点的淋巴细胞。
一、白细胞分离:自然沉降法

灰白层
二、外周血单个核细胞分离
外周血单个核细胞(PBMC):包括淋巴细胞和单核细胞。

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离心
可分离各种血细胞和单个核细胞
分离溶液的基本要求:
①对细胞无毒;
②基本等渗;
③不溶于血浆等分离物质;
④有一定的比重。
较理想的细胞分层液:聚蔗糖—泛影葡***,商品名为:Ficoll
Ficoll分离液法:单次差速密度梯度离心的分离法。
方法:
1、细胞分层液置试管底层;
2、将肝素抗凝全血以Hanks液或PBS液作适当稀释后,轻轻叠加在分层液上面;
3、水平式离心;
4、离心管中会出现几个不同层次的液体和细胞带(见图)
本法分离的单个核细胞纯度可达95%,淋巴细胞约占90%~95%,细胞收率可达80%以上,但室温超过25℃时可影响细胞收率。
用Percoll原液()与约等量的磷酸缓冲液均匀混合,经高速离心后,可使分离液形成一个从管底到液面密度逐渐递减的连续密度梯度,再将已制备的单个核细胞悬液轻轻叠加在液面上,低速离心后,便得四个细胞层。(见图)