文档介绍：动物细胞传代培养
实验目的:掌握动物细胞培养的基本原理和方法。
实验用具:移液枪(每个台面一把),枪头(每个台面一盒),吸管(4根),培养皿(每组2个)
实验药品:%胰酶,1640培养基
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HeLa 是Henrietta Lacks的简称,Henrietta Lacks 是一位患有子宫颈癌的美国妇女的名字,在她死后,该细胞被广泛散发到各研究机构,并无限次地繁殖分裂下去。
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细胞培养的基本概念
传代
细胞在培养器皿中生长一定时间后,被分开接种到新的培养器皿中。
原代培养
取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。
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细胞培养的类型
贴附生长:必须贴附于支持物表面才能生长。见于各种实体瘤细胞。
悬浮生长:
于悬浮状态下即可生长,不需要贴附于支持物表面。见于各种造血系统肿瘤细胞。
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每代贴附生长细胞的生长过程
游离期
贴壁期
潜伏期
对数生长期
停止期(平台期)
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培养细胞生长的条件
1 细胞的营养需要
2 细胞的生存环境
温度: 37 ℃
O2
CO2: 5% CO2 +H2O ←→H2CO3 ←→H+ + HCO3-
pH: -
渗透压
3 无污染
4 无毒
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消化液:
胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽键,除去细胞间粘蛋白及糖蛋白,影响细胞骨架,从而使细胞分离。

胰蛋白酶液浓度越高,作用越强,但超过一定限度会损伤细胞。
胰蛋白酶是一种黄白色粉末,用无Ca2+、Mg2+% 。用滤器过滤除菌。
胰蛋白酶液消化时间:2-10分钟。
用含血清培养液终止其对细胞的消化作用
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培养基
培养基(培养液)是维持体外细胞生存和生长的溶液,分天然培养基和合成培养基。
天然培养基:
天然培养基有血清、血浆、和组织提取液(如鸡胚和牛胚浸液)。
优点:营养成分丰富,培养效果好
缺点:来源受限。成分复杂,影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析。易发生支原体污染
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