文档介绍:集团标准化工作小组 [Q8QX9QT-X8QQB8Q8-NQ8QJ8-M8QMN]
MMFSCNJ出口食品沙门氏菌属包括亚利桑那菌的荧光抗体筛选检验方法
MM_FS_CNJ_0150出口食品 沙门氏菌属(包括亚利 集团标准化工作小组 [Q8QX9QT-X8QQB8Q8-NQ8QJ8-M8QMN]
MMFSCNJ出口食品沙门氏菌属包括亚利桑那菌的荧光抗体筛选检验方法
MM_FS_CNJ_0150出口食品 沙门氏菌属(包括亚利桑那菌) 荧光抗体 筛选检验法
MM_FS_CNJ_0150
出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)的荧光抗体筛选检验方法
本标准适用于冻猪肉、冻鸡肉鸡蛋黄粉和冰鸡蛋白中沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验。其他类食品可参照使用。
2..主要试剂和仪器
主要试剂
L 磷酸盐-生理盐水缓冲溶液(PBS):
溶解无水磷酸氢二钠,氯化钠于1 000mL蒸馏水中,使完全溶解,用酸度计测定其pH值至以上即可,必要时可用1mol/L氢氧化钠调整至左右。
固定液:
按顺序将无水乙醇60mL、三氯甲烷(CHCl3)30mL混匀,再加入36%~38%甲醛10mL,混匀即成;
注:此项固定液配制后可置4 ℃贮存,但重复使用次数以不超过3次为宜。
碳酸盐-甘油缓冲溶液:
溶解无水碳酸钠6g,无水碳酸氢钠37g于蒸馏水中,加至1000mL,使完全溶解,混匀,即成碳酸盐缓冲液。
以上项缓冲液1份加甘油9份混匀即成。
注:① 所用甘油应选用优级纯品或分析纯品。
② 配成后置4 ℃贮存,在贮存期间其pH值逐渐下降,应以每2周左右重新配制一次为宜。
沙门氏菌多价荧光抗体试剂:
选用经的沙门氏菌A-67全价“OH”免疫球蛋白(或沙门氏菌A-60多价“OH”免疫球蛋白),染色时应按试剂所标明的常规染色工作浓度和稀释方法进行稀释后使用。
注:① 所用荧光抗体试剂应在有效期限以内。
② 已稀释的荧光抗体试剂置4 ℃贮存可使用1个月左右,保持其固有的染色亮度不变,如发现其染色亮度下降,则不能继续使用。
.仪器
载玻片:76mm×26mm,厚度~,事先刻好编号及8个小方格,自左至右每行4格,上下共2行(或采用供免疫荧光技术专用的多凹涂膜载玻片),用洗涤剂彻底洗净油污,擦洗干净,并经滴水检查证实无油污后,再浸于95%乙醇中保存备用。
盖玻片:22mm×22mm,厚度~,按同上方法进行去除油污处理。
荧光显微镜:具有透射光或落射光光源装置,配装能透射波长为330~500nm的激发滤片与接收波长大于400nm的阻断滤片。
参照SN 0170第2章进行。
参照SN 0170第2章进行。
.以直径3mm的接种环取已接种试样的最后增菌培养液1环,制成较薄的标本涂片,置37 ℃恒温箱(或室温)充分晾干后,用无水乙醇-三氯甲烷-甲醛固定液固定5~10min,再用95%乙醇浸洗后晾干(此项乙醇重复使用以不