文档介绍：项目三：DNA浓度与纯度的紫外分光光度计法分析
一、实验目的
学****利用紫外分光光度计测定DNA浓度和纯度，掌握浓度和纯度的计算方法和实验操作技术。
二、实验原理
组成核酸的碱基(G, A, T, C)在260 nm处具有强吸收项目三：DNA浓度与纯度的紫外分光光度计法分析
一、实验目的
学****利用紫外分光光度计测定DNA浓度和纯度，掌握浓度和纯度的计算方法和实验操作技术。
二、实验原理
组成核酸的碱基(G, A, T, C)在260 nm处具有强吸收峰，所以通过测定260 nm的吸收峰即可对DNA进行定量。但有时也会因为所处溶液的pH值不同而导致吸光系数的不同，因此，一般在中性pH值左右的环境中进行测定。这种方法常用于测定比较纯的样品。
核酸样品中最常有的其它吸光物质为蛋白质，由于蛋白质在280 nm处具有强吸收峰，因此测定A260/A280比率，可以判断DNA的纯度。纯化的DNA及RNA的A260/A280比，当溶液中含有蛋白质时，会造成A260/A280比值降低。
计算原溶液的浓度(A)：
A260X转换因子x稀释因子=原溶液DNA浓度(gg/ml)每吸光单位
转换因子：双股DNA为50 gg/ml；单股DNA或RNA为40 gg/ml
计算原溶液的摩尔数(以500 bp大小的DN***段为例)：
，因此分子量==162250
摩尔浓度(mol/L)=A/162250 x1000
三、实验仪器
1、紫外-可见分光光度计
2、移液器16套（每2人1套）
四、实验材料
1、无菌枪头20此各2支；
2、离心管
五、实验试剂
1、无菌水
2、待测DNA溶液
五、实验步骤
1、取标准入DNA，稀释，待用。
2、制作标准曲线（教师完成！）
3、取实验一提取的基因组DNA，稀释50倍后待用。
4、测定 A260和 A280
5、计算DNA浓度、纯度
紫外吸收检测DNA浓度与纯度2007年11月13日星期二11:40目的：了解紫外吸收检测DNA浓度与纯度的原理，掌握测定方法。原理：核酸的最大吸收波长为260nm，蛋白质为280nm，在波长260nm时，1OD值相当于双链DNA浓度为50gg/ml，单链寡核苷酸的含量为30gg/ml，可以据此来计算核酸样品的浓度，还可通过测定在260nm和280nm的OD 值的比值（OD260/OD280）,估计核酸的纯度。, 。若比，若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低。
270nm存在高吸收表明有酚的干扰。核酸溶液，对浓度更小的样品，可采用荧光分光光度法。试剂与仪器：提取的质粒DNA，紫外分光光度仪。操作步骤：1）分光光度计先用水在260nm和280nm两个波长下校零。2）取质粒DNA样品2叫，用水稀释100倍，转入分光光度计的石英比色杯中。3）在260nm和 280nm分别读出样品光密度值。
754紫外-可见分光光度计操作规程
用途：能在紫外、可见光谱区域对样品物质作定性和定量的分析。