石菖蒲中生物碱成分的分离与鉴定.doc

文档介绍：石菖蒲中生物碱成分的分离与鉴定
中图分类号 R917; 文献标志码 A 文章编号 1001-0408(2019)05-0642-04
DOI .1001-、醒神益智的功效[1]。临床上,石菖蒲主要用于治疗健忘、中风失语、癫痫、老年痴呆症等[2]。相关研究发现,在治疗老年痴呆症的方剂中,石菖蒲的使用频次最高[3]。
目前,石菖蒲的主要研究侧重于其挥发油成分[4-6],其非挥发性成分的报道却不多。石菖蒲的化学成分多样,除了挥发油以外,还有黄***、醌类、生物碱类、三萜皂苷等[7],均具有一定的药理活性。比如,劳安娜等[8]研究发现石菖蒲中的生物碱成分菖蒲碱乙和菖蒲碱丙可作为预防、改善中老年记忆障碍及老年性痴呆。本文旨在通过阳离子交换树脂,针对性地分离出石菖蒲的生物碱成分,再通过超高效液相色谱串联质谱(UPLC- MS)技术,对其进行成分分析,以期为进一步研究石菖蒲的药理活性奠定基础。
1 材料
仪器与软件
Triple TOF 5600 UPLC-MS仪(美国AB Sciex公司);Agilent Zorbax Eclipse Plus-C18色谱柱(美国Agilent公司);BT224S万分之一电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);001×7阳离子交换树脂(西安蓝晓科技有限公司)。 Peakview (- support/softwaredownloads)、Chemical book软件(/)均由美国AB Sciex公司开发。
药品与试剂
石菖蒲药材为2018年8月采集于南昌梅岭,经江西中医药大学袁金斌教授鉴定为Acorus tatarinowii Schott的干燥根茎;磷酸盐缓冲液(PBS)粉末(北京中山金桥生物技术有限公司,批号:20180121);乙***、甲酸、氢氧化钠、盐酸均为分析纯;水为娃哈哈纯净水。
2 方法
阳离子交换树脂的预处理
加2倍树脂体积的纯净水浸泡001×7阳离子交换树脂24 h,纯净水洗净后,装入层析柱中。用3~4倍体积的4%氢氧化钠冲柱,浸泡2 h后,用纯净水洗至中性;再用3~4倍体积的5%盐酸冲柱,浸泡2 h后,纯净水洗至中性,备用。
石菖蒲生物碱的提取
参考文献[8]中石菖蒲生物碱的提取方法,将100 g粉碎的石菖蒲,过六号筛(100目),置于超声提取器中,加入3 000 mL的蒸馏水,浸泡2 h后,50 ℃超声(功率:200 W,频率:30 kHz)提取2 h,抽滤,得滤液;将滤液于50 ℃减压浓缩后得石菖蒲粗提物。加入粗提物体积5倍的纯净水搅拌成粗提物混悬液,然后通过001×7阳离子交换树脂,静态吸附4 h;再用乙醇洗至洗脱液无色,用4%的氢氧化钠乙醇溶液对阳离子交换树脂进行解析,得解析液;5%盐酸调解析液pH至7,静置2 h后,15 000 r/min(离心半径为5 cm)离心15 min,取上清液50 ℃减压浓缩,即得石菖蒲生物碱浸膏,%。
色谱及质谱条件
色谱条件 色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse Plus-C18(100 μm× μm, μm);%甲酸水溶液(A)-乙***(B),梯度洗脱(~5 min,5%→20% B;5~14 min,20%→23%B;14~25 min,23%→46% B;25~35 min,46%→72%B;35~45 min,72%→80% B;45~50 min,80%→20% B); mL/min;柱温为30 ℃;进样量为1 μL。
MS条件 离子源为电喷雾离子源(ESI),雾化气为60 Psi,辅助气为60 Psi,喷雾电压为5 500 V,离子源温度为600 ℃;在正离子模式下采集数据,数据采集范围为一级质荷比(m/z)100~1 000,二级m/z 50~1 000;采用基于信息关联数据采集(IDA)的一级和二级MS解析方法采集数据,碰撞能量为25 V。
石菖蒲生物碱成分分析
供试品溶液的制备 取“”项下的石菖蒲生物碱浸膏1 mg,PBS溶解, ?m微孔滤膜过滤,得质量浓度为5 mg/mL的供试品溶液。
成分分析 取“”项下供试品溶液,按“”项下条件进样测定,记录石菖蒲生物碱成分的总离子流图及部分成分的