文档介绍：1医院检验科 PCR室作业指导书
文件编号：ABCD-3-PR-28
版本/修订号：A/0
主题内容
乙肝病毒核酸扩增荧光检测
生效日期：20060808
乙肝病毒核酸扩增荧光检测
目的：保证HBV DNA检 1医院检验科 PCR室作业指导书
文件编号：ABCD-3-PR-28
版本/修订号：A/0
主题内容
乙肝病毒核酸扩增荧光检测
生效日期：20060808
乙肝病毒核酸扩增荧光检测
目的：保证HBV DNA检测结果准确、可靠。
适用范围：HBV DNA的TaqMan荧光定量检测，标本类型为血清。
负责人：1 操作人：1 1 1
原理：本试剂盒用一对乙型肝炎病毒特异引物和一条乙型肝炎病毒特异性荧光探针，PCR反应液，耐热DNA聚合酶（Taq酶），四种核苷酸单体（dNTPs）等成分，再用PCR体外扩增法检测丙型肝炎病毒cDNA。
性能参数：检出低值＜1×103基因拷贝/ml。
标本要求：
（1）标本类型：血清。
（2）标本采集：见标本采集手册。
（3）标本储存和运输：室温放置不超过8小时，4-8℃不超过72小时，-20℃保存期6个月，应避免反复冻融。室温运输。
（4）标本拒收状态：细菌污染、严重溶血或脂血标本不能作测定。
1医院检验科 PCR室作业指导书
文件编号：ABCD-3-PR-28
版本/修订号：A/0
主题内容
乙肝病毒核酸扩增荧光检测
生效日期：20060808
容器和添加剂类型：无菌离心管和无菌真空管
所需设备：ABI GeneAmp 5700、台式高速离心机、混匀器、冰箱（4℃、-20℃）、生物安全柜、紫外灯
试剂：DNA提取液（500μl/管）2管；HBV-PCR反应液（未贴标签管）20管；阳性定量质控标准品（1×108基因拷贝/ml）（50μl/管）1管；阴性质控品（250μl/管）1管。
校准程序（计量学溯源性）：送深圳市计量检测所校准。
程序步骤:：
：取血清标本40μl，加等量DNA提取液打匀。（提取液内含不溶于水的物质，取样时需用加样器充分混匀后吸取。如出现因吸头嘴部太细不能吸取或取样后堵塞吸头的现象，可先用洁净无污染的剪刀将吸头嘴部剪去一截。）沸水浴10分钟（误差不超过1分钟），（为保证病毒颗粒充分裂解可转至4℃静置8~12小时）。10000rpm离心5分钟，取上清2μl做PCR反应。
：将阳性定量质控标准品（1×108基因拷贝/ml）6000rpm离心数秒标示为108，，分别加入45
1医院检验科 PCR室作业指导书
文件编号：ABCD-3-PR-28
版本/修订号：A/0
主题内容
乙肝病毒核酸扩增荧光检测
生效日期：20060808
μl阴性质控品，依次标示为107~104。吸取108管5μl至107管，用加样器反复混匀后换新吸头取5μl至106管，依次方法稀释至104管。-20℃保存；分别吸取稀释好的阳性标准品梯度和阴性质控品管各40μl，加等量DNA提取液打匀，以下步骤同上处理。
：取H