文档介绍：实验五黑曲霉发酵生产柠檬酸
柠檬酸（citric acid）又名枸橼酸，学名2-羟基丙烷三羧酸（2-hydroxytricarboxylic acid）或 2-羟基丙烷-1，2， 3-三羧酸（2 — hydroxy propane-1， 然后在柠檬酸合成酶 （柠檬酸缩合酶）的作用下生成柠檬酸。黑曲霉在限制氮源和锰等金属离子条件下，同时在高浓度 葡萄糖和充分供氧的条件下，TCA循环中的a -***戊二酸脱氢酶受阻遏，TCA循环变成“马蹄形”， 代谢流汇集于柠檬酸处，使柠檬酸大量积累并排出菌体外。其理论反应式为：
CH O+ C H O +2H O 6 12 6 2 6 8 7 2
%，%。
三、实验装置与流程
实验装置与材料：
实验装置：旋转式摇床、恒温培养箱、高速离心机(4000〜6500r / min)。
菌种：黑曲霉柠檬酸生产菌株Co8-27。
材料：麸皮，马铃薯，薯干粉，蔗糖，玉米粉，大麦芽，大米，琼脂，淀粉酶(中温酶与高 温酶)。
器皿：15mL试管，100mL三角瓶，2000mL烧杯，500mL三角瓶，离心管若干。
试剂： NaOH，1%酚酞试剂，费林甲，乙溶液，%标准葡萄糖溶液。
实验流程：保藏菌株T活化菌株(斜面培养)T200mL三角瓶麸曲培养T500〜1000mL三角瓶 液体发酵
斜面培养基：
马铃薯琼脂培养基：去皮马铃薯200g切成小块，加水约500mL，煮沸30min，然后用纱布过 滤，滤液加蔗糖20g，琼脂20g .溶化后自来水定容至1000mL，分装于经干热灭菌后的带棉塞试管内， 121°C灭菌20min，取出摆成斜面备用。
麦芽汁琼脂培养基：2/3大麦芽加1/3大米磨碎成粉，按麦芽粉：水：1: 4比例加水，置60C 下糖化4h至碘液显示无色，然后离心15min，获得麦芽汁(或取啤酒厂未加酒花的麦芽汁)调整浓度 5°Bx，添加25g/L琼脂，分装于经干热灭菌后的带棉塞试管内。于121C灭菌15〜20min，取出摆成 斜面备用。
一级种子(麸曲种子)培养基：
(g/L):蔗糖 30； KNO3 ； ； MgSO4 -； ； FeS04 ・；〜，加水定容至1000mL，添加800g麸皮，拌匀至无干粉又无结团， 分装入8〜10个500mL三角瓶中，塞入8层纱布并包扎好。于121C下灭菌30min，趁热摇散，冷却至 35C备用。
：取新鲜麸皮，用60目筛子筛去细粉，按麸皮：水：1： (〜)比例加水， 拌匀至无干粉又无结团，或用水洗麸皮表面，挤去水分至有水感而水不下滴为宜。上述麸皮装入500mL 三角瓶中，每瓶装80〜100g湿料，塞入8层纱布并包扎好。于121C下灭菌30min，趁热摇散，冷却 至35C备用。
摇瓶发酵培养基：取细度为40目以上的薯干粉6〜8g，装入500mL三角瓶中，再加入40mL水和 5个单位a 一淀粉酶(中温)/ g薯干粉，于75〜80C下液化15min，瓶口塞入8层纱布包扎好，于110C 灭菌15〜20min，冷却备用。
取细度为60目以上的玉米