文档介绍：免疫技术:以抗原-抗体反应原理为基础,对样品中相应抗原或抗体进行检测。(高度特异性)
标记技术:将可被探测的示踪物质用化学方法与化合物连接。(如荧光素、放射性核素、酶、化学或生物发光剂等)
标记免疫技术:用可微量或超微量检测的示踪剂标记免疫技术:以抗原-抗体反应原理为基础,对样品中相应抗原或抗体进行检测。(高度特异性)
标记技术:将可被探测的示踪物质用化学方法与化合物连接。(如荧光素、放射性核素、酶、化学或生物发光剂等)
标记免疫技术:用可微量或超微量检测的示踪剂标记抗原/抗体,检测免疫反应结果并确定待检物。
(高度特异性和高度灵敏性的有机结合)
标记免疫技术-基本概念
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免疫技术
试剂
标本
Ag
Ab
Ab
Ag
*
标记免疫技术
试剂
标本
Ag*
Ab
Ab*
Ag
放射性核素
荧光素
酶
化学发光剂
胶体金
标记物
技术
放射性核素
放射免疫技术
荧光素
荧光免疫技术
酶
酶免疫技术
化学发光剂
化学发光免疫技术
胶体金
免疫金技术
标记免疫技术的分类:
免疫组化技术
总体
免疫测定技术
按是否使用放射性免疫测定
放射性核素非放射性免疫测定
按测定反应体均相免疫测定固相免疫测定
系的物理状态非均相免疫测定
液相免疫测定
放射免疫技术
酶免疫技术
按示踪物荧光免疫技术
化学发光免疫技术
免疫金标记技术
三大经典的标记免疫技术
荧光免疫技术
放射免疫技术
酶免疫技术
荧光免疫技术是将抗原抗体反应与荧光技术相结合而建立的一种免疫标记技术,具有高度特异性、敏感性和直观性。
荧光免疫技术是最早出现的免疫标记技术。经典的荧光免疫技术是以荧光素标记抗体对抗原进行定位染色,并借助荧光显微镜观察标本片上荧光染色形态,从而判断是否存在待测抗原----荧光抗体技术。然后才进一步发展出荧光免疫分析技术,可对液体中的抗原、抗体进行自动化定量检测。
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荧光抗体技术
直接法
间接法
直接法:每检测一种抗原必须制备相应的荧光抗体
间接法:敏感性比直接法高,制备一种荧光二抗可用于多种抗原的检测
放射免疫技术始创于1959年Yalow和Berson用放射性核素标记胰岛素,常用于各种激素、微量蛋白质、肿瘤标志物和药物等微量物质的测定。开创了体液微量物质定量分析的崭新领域,并为其他标记免疫分析的建立和发展奠定了基础。
但由于放射污染和危害,常用核素半衰期短,试剂盒稳定期不长等诸多不足,放免将逐渐被取代。
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放射免疫测定法(RIA)示意图
Ag*AbAg
标记抗原特异性抗体待测抗原
(Ag*-Ab)+(Ag-Ab)抗原抗体复合物
分离Ag*-Ab和游离Ag*
从标准曲线上读知含量
测定Ag*-Ab和/或游离Ag*放射性
20世纪70年代初人们利用酶标记抗体或抗原作为主要试剂,创立了酶免疫分析,其后又衍生出酶免疫组织化学技术,两者统称为酶免疫技术。
酶免疫技术
酶免疫组化
酶免疫测定
均相
非均相
固相酶免疫测定
液相酶免疫测定
组织切片或其它标本中抗原的定位
液体标本中抗原或
抗体的定性和定量
用于小分子激素和半抗原(如药物)的测定
酶标记物与相应的抗原或抗体结合后,标记酶的活性会发生改变,不用分离结合和游离酶标记物,通过测定标记酶的活性的改变,而确定抗原或抗体的含量。
原理
均相酶免疫测定
分类:液相酶免疫测定
固相酶免疫测定
以聚苯乙烯等材料作为固相载体的酶联免疫吸附试验(ELISA)是目前最为常用的固相酶免疫测定
与均相不同之处
需分离游离与结合的酶标记物
非均相酶免疫测定
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酶联免疫吸附试验(ELISA)
用酶标记Ab(或Ag)与标本中的Ag(或Ab)发生特异性结合
加入酶的底物,在酶作用下产生有色物质,
根据颜色可作出判断或测量光密度值
+
+
+
双抗体夹心法(检测抗原)
均相酶免疫测定主要用于药物和小分子物质的检测。
非均相免疫测定中的ELISA应用更为广泛,ELISA广泛用于传染病的诊断,病毒如病毒性肝炎(甲肝抗体、“乙肝二对半”、丙肝抗体、丁肝抗体、戊肝抗体)、风疹病毒、疱疹病毒、轮状病毒等;细菌如结核杆菌、幽门螺杆菌等。也用于一些蛋白质检测,如各种免疫球蛋白、补体、肿瘤标志物(甲胎蛋白、癌胚抗原、前列腺特异性抗原等)。
发光免疫分析:是将发光分析和免疫反应相结合而建立起来的一种新的检测微量抗原或抗体的新型标记免疫分析技术。
化学发光免疫分析技术的类型
化学发光酶免疫分析:
用酶标记抗原或抗体,免疫反应后,酶催化发光底物,引发发光。
(直接)化学发光免疫分析:
化学发光物质直接标记抗原或抗体,免疫反应后引发化学发光。
电化学发光免疫分析:
电化学发光剂标