文档介绍：血站核酸检测(jiǎncè)
甘肃省红十字血液中心
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血站核酸(hésuān)检测的意义
核酸检测〔NAT〕可以有效地缩短病毒特异抗原(kàngyuán)和抗体免疫测定的“窗口期〞,从而减少输血风险,提高输血平安血站核酸检测(jiǎncè)
甘肃省红十字血液中心
第一页,共六十三页。
血站核酸(hésuān)检测的意义
核酸检测〔NAT〕可以有效地缩短病毒特异抗原(kàngyuán)和抗体免疫测定的“窗口期〞,从而减少输血风险,提高输血平安。
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乙型肝炎病毒〔HBV〕感染检测中,NAT除可缩短HBV感染检测的窗口期外,还可以减少(jiǎnshǎo)HBV急性感染恢复期、慢性隐匿性HBV感染以及变异病毒株感染的漏检。
丙型肝炎病毒〔HCV〕感染检测中,可将HCV感染检测的窗口期缩短,减少免疫静默感染的漏检。
人类免疫缺陷病毒〔HIV〕感染检测中,可将HIV感染检测的窗口期缩短。
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检测(jiǎncè)窗口期WindowPeriod
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核酸研究的历史(lìshǐ)
1869米舍尔〔FriedrichMiescher〕从脓球别离出细胞核,不受蛋白酶分解,磷含量高,命名为“核素〞(nuclein)。
1944美国微生物学家埃弗里〔〕等的肺炎球菌转化实验。
1953沃森和克里克〔WATSON,CRICK〕-DNA双螺旋
FrancisCrick
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核酸研究的历史
1960年代中期桑格(Sanger)的DNA测序法
1972伯格(PaulBerg)–重组DNA技术引起人肿瘤(zhǒngliú)的猴病毒基因与噬菌体lambda的重组
1973博耶〔HerbertBoyer〕和科恩〔StanleyCohen〕-使用重组DNA技术首次得到了重组DNA微生物(基因工程技术)
1983穆利斯〔KaryMullis)–PCR技术
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核酸(hésuān)的种类
DEOXYRIBONUCLEICACID〔DNA〕
RIBONUCLEICACID〔RNA〕——
ribosomeRNA(rRNA)
transferRNA(tRNA)
messengerRNA(mRNA)
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核酸的分子(fēnzǐ)组成
元素组成(zǔchénɡ)
CHONP〔恒定,9~10%〕
根本结构单位——核苷酸
磷酸
核苷〔戊糖、碱基〕
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核酸(hésuān)的理化性质
核酸(hésuān)分子具有强烈的紫外吸收
DNA变性是双链解离为单链的过程
DNA的增色效应
Tm值
变性的核酸可以复性或形成杂交双链
复性
退火
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核酸分子(fēnzǐ)复性和杂交示意图
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磁珠提取(tíqǔ)的原理:
第一步:细胞的裂解:破碎细胞,并向溶液中参加磁珠
第二步:结合核酸:pH较低,在高盐环境(huánjìng)下,硅胶磁珠带正电荷,选择性的与优化试剂中的核酸结合
第三步:洗涤:用洗涤液将非核酸成分冲洗别离〔为清洗干净该步骤可以重复屡次〕
第四步:核酸的洗脱:pH升高,在低盐环境下,核酸被洗脱下来
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核酸(hésuān)检测根本原理
核酸检测:一系列直接检测病原体核酸的技术的总称(zǒnɡchēnɡ),对靶核酸直接扩增或对其附带的信号扩增,使看不见的极微量的核酸变成直观的光电或可视信号。
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NAT检测技术(jìshù)方法
PCR扩增技术
转录(zhuǎnlù)介导的扩增方法〔TMA、NASBA〕
其它NAT技术〔bDNA、LAMP、LCR、SDA等〕
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PCR原理(yuánlǐ)
DNA
DNA
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TMA的原理(yuánlǐ)
Transcription-MediatedAmplification转录介导的扩增技术(jìshù)
模拟DNA转录成mRNA的自然过程
DNA模板在反响中作为中介
利用2个引物和2种酶(RNA聚合酶和逆转录酶〕
RNA聚合酶与DNA模板的启动子序列结合
等温扩增〔℃〕
转录(zhuǎnlù)
翻译
逆转录
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TMA的原理(yuánlǐ)
特异性靶标捕获
特异性捕获探针与病毒核酸分子及内标物杂交结合,并将其固定在磁珠外表。对体系进行重复的洗涤,去除血液(xuèyè)样品中除病毒核酸外的其他成分。
转录介导的扩增
借助逆转录酶和RNA多聚酶的共同作用,在等温条件下