文档介绍：EPO工程细胞大规模培养方法和反应器
马佳鹏刘丽佳
70期生命科学与技术基地班
沈阳药科大学
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红细胞生成素(erythropoietin,EPO)
红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是一种糖蛋白,它是红细胞发育成熟过程中的一种最重要的调节因子,它在治疗肾衰引起的贫血中,显示明显的疗效和很小的副作用;在纠正恶性肿瘤相关贫血、艾滋病引起的贫血和化疗引起的贫血等方面,也显示乐观的前景;还可在手术前作为自体输血,从而避免感染血源性疾病等等。因此EPO是很有前途的一种细胞因子
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rhEPO的工程细胞
rhEPO (人重组红细胞生成素) 的工程细胞通常使用CHO细胞,因为CHO细胞是重组糖蛋白生产的首选体系,.
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培养基
微载体
生物反应器
rhEPO
rhEPO工程细胞CHO
培养参数
分泌产物
分离纯化
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培养基
天然培养基
合成培养基
无血清培养基
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无血清培养基
无血清培养基是在合成培养基内加入不同种类的补充因子而替代PBS的培养基.
它避免了血清培养基污染的可能性,,不同的细胞甚至不同的细胞株和细胞系有各自独立的无血型培养基配方.
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补充因子是无血清培养基中各种血清替代成分的总称。补充因子的种类繁多,主要有生物大分子、小分子和微量元素等。补充因子又可归类为必需补充因子和特殊补充因子。
必需补充因子:胰岛素、转铁蛋白和亚硒酸钠所有的细胞株在无血清培养基中生长时都需要的,
特殊补充因子:①生长因子②激素③贴壁因子④其它补充因子
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:细胞无血清培养中,~10μg·mL-1。胰岛素可以促进RNA、蛋白质和脂肪酸的合成,抑制细胞凋亡,是重要的细胞存活因子,部分学者认为在批式培养中胰岛素迅速耗尽是细胞比生长速率下降的主要原因。
CHO细胞能在仅含重组人胰岛素一种蛋白成分的无血清培养基中连续传代
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:大多数哺乳动物细胞上存在特定的转铁蛋白受体,受体与转铁蛋白/Fe3+复合物结合是细胞获取必需的微量元素铁的主要来源,此外转铁蛋白还具有生长因子的性质并能与其他微量元素如钒等结合。~100μg·mL-1,亦有研究报告指出,无血清培养基中必须要有转铁蛋白至少5μg·mL-1,胰岛素才能起作用。也有资料证实转铁蛋白在无血清培养基中的作用可以为某些铁盐所代替,如柠檬酸铁、二甲胂酸铁、葡糖酸铁等。
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:Hewlett在1991年曾指出硒在任何一种细胞,特别是人体细胞的生长过程中确实具有明显作用,微量元素硒参与谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化物歧化酶的作用过程,消除氧化物酶和氧自由基对细胞的伤害。亚硒酸钠的最适添加浓度是30~60nmol·L-1。
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