文档介绍：实验1、培养基母液的配制
一、实验目的
1、了解植物组织与细胞培养基的基本类型和组成。
2、掌握植物组织与细胞培养基各种母液的配制方法。
二、实验原理
离体植物组织和细胞的生长、分化所需要的营养物质都是由培养基供给。基本培养基通常包括大量元素、微量元素、有机物以及糖和水,完全培养基是在基本培养基的基础上,附加植物生长调节剂、椰乳、香蕉汁、番茄汁等天然提取物。迄今为止,基本培养基的配方已有几百种,但较常用的有一二十种,如MS、White、N6、B5等。
实验用的培养基一般是先配成10-100倍的母液,用时再按配方配制培养基。
二、实验用品
1、实验器材:冰箱、电炉、电子天平、移液管、量筒、烧杯(1000mL、500mL、50mL)、容量瓶、玻璃棒、试剂瓶(1000mL)、标签纸等。
2、实验试剂:MS培养基配方中的19种试剂,2,4-D,KT, NaOH,HCl,95%乙醇, HgCl2,次***酸钠,蒸馏水等。
三、实验方法
1、大量元素母液的配制
按表1-1计算并称取各试剂,用蒸馏水依次溶解,最后定容到1000mL,即为10倍的大量元素母液,倒入试剂瓶,贴好标签,保存于4℃冰箱里。
表1-1 MS培养基大量元素母液试的配制
母液
成份
规定量/(mg·L)
扩大倍数
配制母液体积/L
称取量/mg
备注
大量元素母液
KNO3
1900
10
1L
19000
√
NH4·NO3
1650
16500
√
MgSO4·7H2O
370
3700
√
KH2PO4
170
1700
√
CaCl2·2H2O
440
4400
√
注意1: ①称取量的值(mg)=规定量(mg/L)×扩大倍数×母液体积(L)
②每称量一种试剂,都要在备注栏中相应的部分做好标记,比如写上日期和划出“√”。注意2:
①为避免沉淀现象发生,应将Ca2+、SO42-、Mg2+和H2PO4一等离子错开混合,速度宜慢,边搅拌边混合;
②CaCl2·2H2O要在最后单独加入,在溶解CaCl2·2H2O时,蒸馏水需加热沸腾,除去水中的CO2,以防沉淀。另外,CaCl2·2H2O放入沸水中易沸腾,操作时要防止其溢出。
③如遇沉淀,缓慢加入(注意搅拌)1mol/L的Hcl将其溶解。
2、微量元素母液的配制
按表1-2计算并用分析天平称取各试剂,用蒸馏水依次溶解,最后定容到1000mL,即为100倍的微量元素母液,倒入试剂瓶,贴好标签,保存于4℃冰箱里。
表1-2 MS培养基微量元素母液的配制
母液
成份
规定量/(mg·L)
扩大倍数
配制母液体积/L
称取量/mg
备注
微量元素母液
MnSO4·4H2O

100
1L
2230
√
ZnSO4·7H2O

860
√
H3BO3

620
√
KI

83
√
Na2MoO4·2H2O

25
√
CuSO4·5H2O

√
CoCl2·6H2O

√
3、铁盐母液的配制
MS培养基硫酸亚铁和乙二***四乙酸二钠的螯合物,必须单独配成母液。配制时,按照表1-3的数据称取,分别用蒸馏水加热搅