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攀敝懈獭:椤论文作者签名:彻辏迈日期:必日期:油年易月权益。:匕玺┤生├忌植椋海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明学位论文版权使用授权说明本人郑重声明:所犟交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究:作所取得的成果。除文中已经注明引刚的内容外,本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本卢明的法律结果由本人承担。本人完全了解海南人学关丁收集、保存、使用学位论文的规定。即:学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权海南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本人在导师指导下完成的论文成果,知识产权归属海保密论文在解密后遵守此规定。本人已经认真阅读“文提交“咝Q宦畚娜氖菘狻敝腥姆⒉迹⒖砂础罢鲁獭敝泄娑ㄏ硎芟喙南人学和中国热带农业科学院。导师日期高校学位论文全文数据库发布章程”,同意将本人的学位论同.
根据已发表腃蚉蛳盗猩杓铺匾煨砸铮τ肦呻构建重组表达质粒蚿。。我国也在年首次在广西出现了甘蔗黄叶病。甘蔗黄叶病毒琒歉收峄埔恫〉牟≡铮粲诨浦⒉《科马铃薯卷叶病毒属,病毒粒子呈二十面对称体,无包膜,直径,电镜下观察外形呈六边形。基因组大小约个核苷酸,由一条正单链槌桑个丌放阅读框H誌『世界上报到的全基因组有个,相关编码蛋白功能的研究报道较少。本文克隆获得了海南掷胛的全基因组,分析了该分离物与已报道的其它分离物之问的亲缘关系,为确定海南睦丛刺峁理论依据。克隆D戏掷胛锏腃蚉颍云浣性吮泶铮⒐建细菌双杂交诱饵质粒。为进一步研究和蛋白在病毒侵染和致病中的功能奠定基础。本文就海南地区具有典型甘蔗黄叶综合症的病样进行了以下三个方面的初步研究,其研究结论如下:⒊晒寺分离物的基因组序列,该序全长,包含个开放阅读框。对该分离物的基因组分子进化进行了分析。其结果显示,海南分离物与蛐偷腟具有很高的一致性,其比率达到了..%.蚉虻脑吮泶技术从甘蔗病叶的扩增得到目的巍P蛄蟹治霰砻鞒晒竦萌ǔ基因的开放阅读框包括龊塑账幔嗦个氨基酸;全长基因的开放阅读框包含龊塑账幔嗦个氨基酸。以T吮泶镌靥澹将重组表达质粒转入大肠杆菌,在培养条件下诱导表达。通过甈缬炯觳馊诤系鞍妆泶锴榭觥1泶锝峁允荆诟帽泶系统中,融合表达蛋白是以包涵体形式的蛋白存在;融合表达蛋白主要%.
是以可溶性蛋白的形式存在,但也有少量的融合蛋白以包涵体存在。融合蛋白大小约隒7旁亩量虻睦砺弁扑阒由显靥陨淼鞍自喾籔诤系鞍状笮≡⑾妇咏挥斩柿5墓菇ㄓ氡泶锓治黾白约せ罴觳构建和细菌双杂交诱饵质粒后,可通过从甘蔗猎物文库中筛选与其具有相互作用的蛋白,从而对它们的功能进行研究。通过扩增和的编码区,将其插入带有入基因的靥迳希佣肴雃蛐纬扇诤匣因,建成重组质粒和,即诱饵质粒。将诱饵质粒转化大肠杆菌甂感受态细胞,在℃培养条件下诱导重组融合蛋白表达。甈薹ḿ觳馊诤系鞍椎谋泶锴榭觯褂萌隿鞍椎目寡G遄魑一抗,对表达产物作免疫印迹检测,结果显示一入和一入融合蛋白均有表达。诱饵质粒分别同质粒共转化大肠杆菌瓸直鹪诤猅和不含—钠桨迳媾嘌鄄炀渖で榭觯并与阴性对照比较。结果显示,诱饵质粒和均无自主活化作用,可用于下一步的文库筛选试验。关键词:甘蔗黄叶病毒基因组外壳蛋白聊种谱釉吮泶细菌双杂交瓸●
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