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年步月吼叫年学位论文作者:暂:雕日期:≯学位论文使用授权声明原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者:
对耐药相关基因饔眯вΦ难芯摘要硕士研究生:曹琼指导教师:金戈教授郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室河南郑州食管癌是发生在食管上皮组织的恶性肿瘤,占所有恶性肿瘤的ィ夜鞘澜缟鲜彻馨└叻⒌厍骄磕瓴∷涝蛉耍术后化疗是治疗食管癌的重要方法之一。近些年,由于药物的不规范使用、肿瘤细胞基因的不稳定性、表达异质性、高突变率以及个体对化疗方案的敏感性差异等原因,导致患者预后很差,肿瘤产生耐药性是术后肿瘤病人化疗失败及复发的主要原因之一,因此,降低肿瘤细胞耐药性成为临床治疗亟待解决的重要问题。沉默信息调节因子琒侨死的嘧榈鞍兹ヒ阴;,翻译后的蛋白质分子量大小约为,具有依赖的去乙酰基酶活性。它在鹕诵薷础⑾赴芷诳刂啤⒁种葡赴蛲觥⒌挚寡趸婢澈延长细胞寿命方面起着重要作用,因此怀莆!俺な倩。研究表明种临床肿瘤的活检标本和不同细胞来源的耐药细胞,均发现母咚奖达,能直接诱导多药耐药基因的表达。肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体,是通过与和薪细叩男蛄型葱员发现的,又被称为ㄎ辉谌死号染色体上,全长大约有,。蚱淠芄挥行У匾种并杀死肿瘤细胞但对正常细胞的凋亡作用较小而引起人们的普遍关注。有研究显示,箍捎牖⒎帕菩⒒幼饔茫佣锏侥孀V琢瞿褪堋⒍嘁D鸵的目的。但国内关于肽鸵┗騍作用关系的研究很少,尚未见报道。,用脂质体转染食管癌细胞来进一步研究谑彻馨┫赴械谋泶锛捌洳牡蛲鲂应,并初步探讨灾琢瞿鸵┫喙鼗騍的作用效应,为降低肿瘤耐畆猧。
.±。目的:构建真核表达载体.‘,检测其在食管癌细胞中的表达及产生的凋亡作用,并初步探讨灾琢瞿鸵┫喙鼗騍的作用效应,为逆转肿瘤细胞的多药耐药性提供实验基础。方法:用和盖械姆椒ù釉嗽靥錺上切下目的基因厥沾笤大小片段,;用脂质体将重组质粒转染到人食管癌细胞中,院笥肦狿和免疫细胞化学方法分别检测其在食管癌细胞中和蛋白水平的表达;光学显微镜和倒置相差显微镜观察细胞凋亡过程的一般生物学形态变化;用流式细胞技术检测转染重组质粒后对食管癌细胞产生的凋亡效应;—兔庖呦赴Хǚ直鸺觳庵刈橹柿对耐药相关基因膍偷鞍妆泶锼降挠跋欤醪教教諸对肿瘤耐药相关基因淖饔眯вΑ结果:一一刈檎婧吮泶镌靥錺墓菇ḿ凹用虰盖衟一柿#厥赵大小片段,,构建重组质粒;。刈橹柿基因在食管癌细胞中表达的鉴定重组质粒用脂质体瞬时转染食管癌细胞,螅崛∠赴鸕,—⒆H緋罩柿W楸泶量显著增高,电泳结果经软件检测未转染组、转染空质粒组和转染组灰度值与相应内参的比值分别是.、.,说明转染目的基因组虻膍泶锵灾銮;转染螅妹庖呦赴化学方法检测显示谙赴ぁ⒅示斜泶锴易H灸康幕蜃榈淖鼗粕显高于未转染组,经软件检测得到的灰度值分别为允彻馨┫赴牡蛲鲎饔流式细胞术结果显示:转染重组质粒醇蛲銮撸后细胞周.±¨‘..’
摘要期有凋亡曲线,较未转染组增殖指数减少明显,说明转染后基因的凋亡作用达高峰。刈橹柿6灾琢瞿鸵┫喙鼗騍的作用效应重组质粒用脂质体瞬时转染食管癌细胞,螅崛∠赴鸕,—⑽醋H咀椤⒆H緋罩柿W楸泶量显著降低,电泳结果经软件检测未转染组、转染空质粒组和转染组灰度值与相应内参的比值分别是.、.,,用免疫细胞化学方法检测显示谙赴恕⒅时泶锵灾档图负醪患鼗粕ǹ帕#飨低于未转染组,经软件检测得到的灰度值分别为.±.±说明芟灾种颇鸵┫喙鼗騍蛋白水平的表达。结论:臼笛槌晒Φ毓菇苏婧吮泶镌靥錺⒅な灯淠在人食管癌细胞中的和蛋白水平大量表