文档介绍：中国农业科学院学位论文一种基于细胞内转录的猪瘟病毒快速拯救系统./硕士研究生:黄俊华师:仇华吉研究员申请学位类别:农学硕士业:预防兽医学研究方培养单位:哈尔滨兽医研究所研究生院密级:论文编号:指导教专向:分子病毒学与免疫学提交日期月:
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欲/谚莎\\‘\\、答辩委员会签名表中国农业科学院一种基于细胞内转录的猪瘟病毒快速拯救系统黄俊华专业研究方向仇华吉研究员培养单位芯克哈尔滨兽医研究所姓名位论文题目论文作者预防兽医学指导教师职称硕单签名分子病毒学与免疫学评硕导口研究员博导曲人毕丁仁教授华中农业大学博导豳辩军事医学科学院军事涂长春兽医研究所扈荣良王晓钧硕导囤博导口崔尚金王秀荣委员会议记录厥王永强论文答辩时间地点年展跏抟窖芯克醣ǜ嫣薛飞阅答主席
聊躲芗移帆炒阧即日研究生龇罐拮帆驯年录尤论文作者签名:童粮关于论文使用授权的声明独创性声明时间:加C艿难宦畚脑诮饷芎笥ψ袷卮诵本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定,即:中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。年‘月H
摘要珻怯芍砦敛《珻引起猪的一种高度接触性、致死性传染病,=⒁恢植灰览蹈ㄖ《镜母咝д认低常糜贑姆聪蛞糯ú僮鳎狙芯坷用逆转录病毒介导建立稳定表达酆厦腜赴担诠菇–门株全长感染性克隆的基础上,利用体外转录拯救系统和细胞内转录的拯救策略均成功拯救出子代病毒,这种基于细胞内转录的拯救系统比体外转录拯救病毒的操作更简便、效率更高。采用寺ǎ源蟪Ω司鶥细胞基因组为模板扩增基因,将其克隆到逆转录病毒载体校菇ㄖ刈橹柿弥侍遄H局罰赴竦弥刈槟孀B病毒浣又钟赑细胞,通过加压筛选和单细胞克隆纯化,并采用⒓接免疫荧光试验癟舳涌刂葡碌暮焐ü獾鞍椎闹刈楸泶镏柿瞬时表达,检测的表达及活性,建立了稳定表达的细胞系/。经验证,该细胞系在压力培养条件下连续传至代均能保持的转录活性。,通过┰龅玫搅烁哺瞧浠蜃槿ǔさ个片段,顺次插入至靥逯校菇═石门株基因组克隆线性化,体外转录所得的H綪细胞,获得病毒煌痹趐入丁型肝炎病毒核酶和终止子,获得阳性质粒甊砸,直接转染厂细胞获得子代病毒鳌7直鸩捎肦⒂ü舛縋、和电镜观察对上述两种方法拯救的病毒进行验证,结果表明,与腔疽恢碌模掖嬖分子标签;病毒动力学生长曲线的结果表明,表现出与牒颓妆静《相似的生物学特性,甊西的最高滴度与挥邢灾钜欤涣硗馔ü宰代病毒基因组进行测序证明在/细胞上具有较好的遗传稳定性。细胞内转录拯救系统具有效率高、周期短、成本低和稳定性好的优点,能应用于猪瘟病毒的快速高效拯救。本研究建立了稳定表达的细胞系/,并在此基础上实现了对石门株感染性克隆子代病毒的快速高效拯救,结果表明建立的以为基础的细胞内转录的病毒拯救系统大大提高了反向遗传操作的效率,为进一步揭示病毒致病机理和新型疫苗研制提供成熟的操作平关键词:猪瘟病毒;反向遗传操作;逆转录病毒;酆厦福晃榷ㄏ赴猪瘟艘台。
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目录第一章绪论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯猪瘟及猪瘟病毒概述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..砦痢猪瘟病毒及其基因组结构⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯猪瘟病毒的细胞培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.逆转录病毒表达载体及其应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..反向遗传操作概述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.《净蜃槿ǔ寺〉⋯⋯⋯⋯⋯⋯..研究背景与目的⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..酆厦窹细胞系的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.辍⒅⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..的重组逆转录病毒载体的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯...秆∨ǘ鹊娜范ā的重组逆转录病毒的包装⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.赴瞪秆基因的ā在/细胞系中的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯..彩北泶锖焐ü.
转录活性的鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...细胞系稳定性检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.结果⋯⋯⋯